基因合成与载体构建-基因合成与载体构建的区别
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1、人工化学合成dna的化学方法?
第一步:目的基因的获取
1. 编码蛋白质的结构基因 。
2.原核基因采取直接分离获得,真核基因是人工合成。
3.PCR技术扩增目的基因
(1)原理:DNA双链复制
(2)过程:第一步:加热至90~95℃DNA解链;第二步:冷却到55~60℃,引物结合到互补DNA链;第三步:加热至70~75℃,热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成。
第二步:基因表达载体的构建
1.使目的基因在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传至下一代,使目的基因能够表达和发挥作用。
2.组成:目的基因 启动子 终止子 标记基因
第三步:将目的基因导入受体细胞_
转化方法:
将目的基因导入植物细胞:采用最多的方法是 农杆菌转化法。
将目的基因导入动物细胞:最常用的方法是 显微注射技术。此方法的受体细胞多是 受精卵。
3.重组细胞导入受体细胞后,筛选含有基因表达载体受体细胞的依据是标记基因是否表达。
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