分子生物构建载体是什么,pmd质粒载体是什么意思?
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1、pmd质粒载体是什么意思?
1.载体的概念
把一个目的基因通过基因工程手段送到生物细胞(受体细胞),需要运载工具(交通工具)携带外源基因进入受体细胞,这种运载工具就叫做载体(vector)。
基因工程上所用的载体是一类能自我复制的DNA分子,其中的一段DNA被切除而不影响其复制,可用以置换或插入外源(目的) DNA而将目的DNA带入宿主细胞。常用的载体有质粒、噬菌体、病毒等。
2.质粒(Plasmid)的概念
质粒是生物细胞内固有的、能独立于寄主染色体而自主复制、并被稳定遗传的一类核酸分子。质粒常见于原核细菌和真菌中,绝大多数的质粒是DNA型的,少部分为RNA型。天然DNA质粒大都具有共价、封闭、环状的分子结构,其分子量范围:1-300 kb。细菌质粒是基因工程中最常用的载体。
质粒载体按功能分:
克隆载体—都有一个松弛的复制子,能带动外源基因,在宿主细胞中复制扩增。它是用来克隆和扩增DNA片段(基因)的载体。
表达载体—具有克隆载体的基本元件(ori,Ampr,Mcs等)还具有转录/翻译所必需的DNA顺序的载体。
质粒载体按进入受体细胞类型分:
原核载体
真核载体
穿梭载体(sbuttle vector)指在两种宿主生物体内复制的载体分子,因而可以运载目的基因(穿梭往返两种生物之间)。穿梭质粒含原核和真核生物2个复制子,以确保两类细胞中都能扩增。
pmd质粒载体是指一种高效克隆PCR产物(TA Cloning)的专用载体。本载体由pUC19载体改建而成,在pUC19载体的多克隆位点处的Xba I和Sal I识别位点之间插入了EcoR V识别位点,用EcoR V进行酶切反应后,再在两侧的3’端添加“T”而成。
因大部分耐热性DNA聚合酶进行PCR反应时都有在PCR 产物的
质粒是小型环状DNA分子,在基因工程中作为最常用,最简单的载体,必须包括三部分:遗传标记基因,复制区,目的基因。 质粒在所有的细菌类群中都可发现,它们是独立于细菌染色体外自我复制的DNA分子
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