大家好，今天小编关注到一个比较有意思的话题，就是关于载体构建链接用什么方法的问题，于是小编就整理了3个相关介绍载体构建链接用什么方法的解答，让我们一起看看吧。

1. 外源性基因与载体的连接方式有哪些
2. 载体构建的原理及方法
3. 过表达载体构建方法

1、外源性基因与载体的连接方式有哪些

【答案】：（1）黏性末端连接：将靶基因片段和载体DNA经相同的限制酶分别切割，使它们两端产生相同的黏性末端。

带有非互补突出端的片段连接：这种类型的连接通常涉及到使用两种不同的限制性内切酶进行消化，以产生带有非互补的粘性末端。这也是最容易克隆的dna片段。在PCR扩增时，可以在dna片段两端加上不同酶切位点以便与载体相连。

外源DNA片段和线状质粒载体 的连接，也就是在双链DNA5；磷酸和相邻的3；羟基之间 形成的新的共价链。如质粒载体的两条链都带5；磷酸，可生成4个新的磷酸二酯链。

上述两种重组分子均可用相应的限制性核酸内切酶重新切除外源DNA片段和载体DNA，克隆的外源DNA片段可以原样回收。用两种同尾酶分别切割外源DNA片段和载体DNA，由于产生的黏性末端相同，因此也可方便地连接。

2、载体构建的原理及方法

原理步骤如下：载体构建的原理：载体构建是指将外源DNA片段导入到特定的载体中，以便将其传递到目标细胞中。常用的载体是质粒，其具有自主复制和传递的能力。

设计引物加接头，扩增目的基因，连接到T载体上测序。

原理：将外源基因片段与载体连接（载体通常选用质粒或者噬菌体或其他病毒），将重组的载体转染受体细胞，使之整合入宿主基因组或者在稳定存在于胞质内，是宿主细胞能够表达载体上的外源基因，从而获得新性状或者新产物。

载体构建目的 ①用它作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞中去。②利用他在宿主细胞内对目的基因进行大量的复制（称为克隆）。理想的运载体是质粒（plasmid），在基因工程中，常用人工构建的质粒作为载体。

3、过表达载体构建方法

首先要用一定的限制酶切割质粒，使质粒出现一个缺口，露出黏性末端。用同一种限制酶切断目的基因，使其产生相同的黏性末端。

当拿到一个基因的DNA片段后，就需要把它导入一个载体，一方面长期保存。另一方面也需要以载体为媒介将基因导入受体细胞中。基因表达载体的构建是基因工程的核心。常用的载体有细菌质粒，噬菌体和动植物病毒。其中质粒载体最常用。

图 过表达载体构建示意图目前已从动物、植物、病毒及微生物中分离到许多适用于植物的启动子。

基因过表达的基本原理是通过人工构建的方式在目的基因上游加入调控元件，使基因可以在人为控制的条件下实现大量转录和翻译，从而实现基因产物的过表达。 基因过表达的步骤是： 1，构建克隆。

载体构建 一．原理 依赖于限制性核酸内切酶，DNA连接酶和其他修饰酶的作用，分别对目的基因和载体 DNA进行适当切割和修饰后，将二者连接在一起，再导入宿主细胞，实现目的基因在宿主细胞内的正确表达。

到此，以上就是小编对于载体构建链接用什么方法的问题就介绍到这了，希望介绍关于载体构建链接用什么方法的3点解答对大家有用。