大家好，今天小编关注到一个比较有意思的话题，就是关于双荧光报载体构建的问题，于是小编就整理了5个相关介绍双荧光报载体构建的解答，让我们一起看看吧。

1. 双荧光素酶报告基因
2. 荧光素酶报告基因检测
3. 双荧光素酶报告基因实验原理
4. 双荧光素酶应用实例(一)
5. 双荧光素酶报告基因实验原理?

1、双荧光素酶报告基因

构建负责表达荧光素酶的载体：在实验中，通常将感兴趣的基因调控区域与荧光素酶基因关联起来，构建成双荧光素酶报告基因的表达载体。这个基因构建过程通常通过分子克隆技术来完成。

miRNA主要通过作用于靶基因的3’ UTR起作用，因此可以将目的基因的3’ UTR区域构建到载体报告基因萤火虫荧光素酶的后面，通过与miRNA共转染后，检测报告基因表达的变化来反映miRNA对目的基因的抑制作用。

为了减少实验误差，同时转染一个能稳定表达的 肾荧光素酶 的质粒作为内参，催化 腔肠素 氧化产生蓝光（波长460-540nm）；所以叫双荧光素酶报告基因检测。

双重荧光素酶报告基因优点是具有灵敏度高，缺点是需要多次实验。双荧光素酶报告基因检测系统因其具有灵敏度高、无细胞内源性表达干扰等优势，现已被广泛用于基因表达调控的研究中，同批次样品检测值也可能出现浮动。

双荧光素酶报告基因实验原理具体如下：双荧光素酶报告基因实验原理是利用双荧光素酶作为荧光素酶的标记来研究基因表达与调控的机制。

2、荧光素酶报告基因检测

构建负责表达荧光素酶的载体：在实验中，通常将感兴趣的基因调控区域与荧光素酶基因关联起来，构建成双荧光素酶报告基因的表达载体。这个基因构建过程通常通过分子克隆技术来完成。

用生物信息学方法分析并预测启动子区可能的转录因子结合位点。（2）设计引物用PCR法从基因组DNA中克隆所需的靶启动子片段，将此片段插入到荧光素酶报告基因质粒（pGL3-basic）中。（3）筛选阳性克隆，测序。

Luciferase报告基因系统是以荧光素（luciferin）为底物来检测萤火虫荧光素酶（fireflyluciferase）活性的一种报告系统。荧光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的过程中，会发出生物荧光（bioluminescence）。

其原理简述如下：（1）构建一个将靶启动子的特定片段插入到荧光素酶表达序列前方的报告基因质粒，如pGL3-basic等。（2） 将要检测的转录因子表达质粒与报告基因质粒共转染293细胞或其它相关的细胞系。

3、双荧光素酶报告基因实验原理

双荧光素酶报告基因实验原理是利用双荧光素酶作为荧光素酶的标记来研究基因表达与调控的机制。

构建负责表达荧光素酶的载体：在实验中，通常将感兴趣的基因调控区域与荧光素酶基因关联起来，构建成双荧光素酶报告基因的表达载体。这个基因构建过程通常通过分子克隆技术来完成。

在测量过程中，当加入荧光素酶检测试剂II （LARII）时产生萤火虫荧光信号，这样先测量萤火虫荧光素酶报告基因。

miRNA主要通过作用于靶基因的3’ UTR起作用，因此可以将目的基因的3’ UTR区域构建到载体报告基因萤火虫荧光素酶的后面，通过与miRNA共转染后，检测报告基因表达的变化来反映miRNA对目的基因的抑制作用。

4、双荧光素酶应用实例(一)

例子4 例子5---启动子结构分析。将启动子区域（约2k左右）进行分段截短或突变，构建入报告基因载体，检测荧光素酶活性。

细胞处理： 双荧光素酶检测试剂盒依照protocol操作；荧光检测： 使用酶标仪或具有类似检测功能的设备进行荧光强度检测 数据分析 实验案例：CDK9是miR-206的靶标（a），但是CDK9突变型不是miR-206的靶标（b）。

利用双荧光素酶系统，在水稻原生质体内证实OsJAZ9可以降低OsMYB30的转录激活活性并且增强OsMYB30对于BMY2/6/10基因启动子的抑制作用从培养基上切取培养8-10d的水稻幼苗，去除幼苗外层包裹的叶子。

以Promega公司双荧光素酶检测试剂盒为例： 试剂准备 按照说明书配制PLB细胞裂解液、LAR II检测液、StopGlo检测液。

双荧光素酶通常是指萤火虫荧光素酶和海肾荧光素。其中荧火虫荧光素是从甲虫（Photinus pyralis）中分离得到，分子量为61kDa；而海肾（Renilla）荧光素酶则是从海肾（Renilla reniformis）中分离，分子量为36kDa。

5、双荧光素酶报告基因实验原理?

双荧光素酶实验原理：利用荧光素酶与底物结合发生化学发光反应的特点，把感兴趣的基因转录的调控元件克隆在萤火虫荧光素酶基因（firefly luciferase）的上游，构建成荧光素酶报告质粒。

以下是双荧光素酶报告基因实验的基本原理步骤：构建负责表达荧光素酶的载体：在实验中，通常将感兴趣的基因调控区域与荧光素酶基因关联起来，构建成双荧光素酶报告基因的表达载体。

利用荧光素酶与底物结合发生化学发光反应的特性，把感兴趣的基因转录的调控元件克隆在萤火虫荧光素酶基因（firefly luciferase）的上游，构建成荧光素酶报告质粒。然后转染细胞，适当刺激或处理后裂解细胞，测定荧光素酶活性。

实验简介 Luciferase报告基因系统是以 荧光素（luciferin） 为底物来检测 萤火虫荧光素酶 （fireflyluciferase）活性的实验。荧光素底物会在荧光素酶作用下会发光（波长540-600nm），且光强能反应荧光素酶的表达量。

miRNA主要通过作用于靶基因的3’ UTR起作用，因此可以将目的基因的3’ UTR区域构建到载体报告基因萤火虫荧光素酶的后面，通过与miRNA共转染后，检测报告基因表达的变化来反映miRNA对目的基因的抑制作用。

关于双荧光报载体构建和双荧光素酶报告系统原理和步骤的介绍到此就结束了，不知道你从中找到你需要的信息了吗 ？如果你还想了解更多这方面的信息，记得收藏关注本站。 双荧光报载体构建的介绍就聊到这里吧，感谢你花时间阅读本站内容，更多关于双荧光素酶报告系统原理和步骤、双荧光报载体构建的信息别忘了在本站进行查找喔。