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1. cdna文库原理？

1、cdna文库原理？

经典cDNA文库构建的基本原理：用Oligo（dT）作逆转录引物，或者用随机引物，给所合成的cDNA 加上适当的连接接头，连接到适当的载体中获得cDNA文库。

其基本步骤包括：

（1）mRNA的提纯获取高质量的mRNA是构建高质量的cDNA文库的关键步骤之一。

（2）cDNA第一条链的合成。

（3）cDNA第二条链的合成。

（4）双链cDNA的修饰。

（5）双链cDNA的分子克隆。

（6）cDNA文库的扩增。

（7）cDNA文库鉴定评价。

CDNA文库是利用反转录酶将RNA转录成cDNA，然后将cDNA插入到合适的载体中，形成文库的一种技术手段。
1.反转录酶能够将RNA转录成cDNA，这是CDNA文库的必要前提。
2.通过将cDNA插入载体并进行转化，可以将cDNA文库稳定地嵌入宿主细胞中，进而进行进一步的克隆筛选、DNA测序和基因功能研究等。
3.在实际研究中，CDNA文库具有样本来源丰富、出库速度快、复制度高、存储条件易于控制等优点。

cdna文库是一种找到真核生物中已转录mRNA的方法。
1. 其原理是将真核细胞合成出来的mRNA反转录制备成cDNA，再进行PCR扩增构建cDNA文库。
2. cDNA文库这种方法的优点在于可以获得大量的转录物信息，既可以发现基因结构，也可以分析剪切等调控信息。
3. 而建立一个cDNA库需要的RNA数量较大，而且基因转录量高低不一，需要筛选外显子以及序列分析，所以提纯RNA是实验中一个非常关键的操作。

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