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蛋白瞬时载体构建-瞬时转化载体

蛋白瞬时载体构建-瞬时转化载体

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  1. 原生质体瞬时表达原理?

1、原生质体瞬时表达原理?

瞬时表达,即瞬时转染后的初期,质粒或DNA片段是游离在细胞中的,能够进行表达,成为瞬时转染表达。随后,游离在细胞中的质粒或DNA片段有两种归化,一种是被降解,还有一种是插入染色体中而能够持续地稳定地表达。

在载体选用方面,瞬时表达可以不需要筛选标签,如常用的NEO抗G418等,但使用稳定表达的载体亦可以用来进行瞬时表达。

植物瞬时表达系统

当外源基因导入植物细胞中以后,其表达方式有瞬时表达(transientexpression)和稳定表达(stable expression)两种。在瞬时表达状态的基因转移中,引入细胞的外源DNA和宿主细胞染色体DNA并不发生整合。这些DNA一般随载体进入细胞后12小时内就可以表达,并持续约80小时左右。在稳定表达状态的基因转移中,导入宿主细胞的DNA整合到细胞染色体DNA上,以永久形式存在,并可传给后代,形成稳定的转化细胞。基因的导入方法可分为间接转基因方法和直接转基因方法。

植物瞬时表达系统在启动子分析、基因功能分析和生产重组蛋白方面用途广泛。并且具有如下优点:①简单快速。转化基因可在转化的一周内进行分析,避免了组织培养等繁杂过程;②表达水平高。当单链的T-DNA进入植物细胞后,许多未整合到植物基因组中的游离外源基因同样可以表达。③安全有效。不受植物生长发育过程的影响,不产生可遗传的后代,结果可靠直观,不存在基因漂移的风险。常用基因枪转化和农杆菌真空渗透法

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