本篇文章给大家谈谈如何构建基因载体质粒结构，以及构建基因表达载体的目的有哪三点对应的知识点，希望对各位有所帮助，不要忘了收藏本站喔。 今天给各位分享如何构建基因载体质粒结构的知识，其中也会对构建基因表达载体的目的有哪三点进行解释，如果能碰巧解决你现在面临的问题，别忘了关注本站，现在开始吧！

1. 质粒构建原理和过程？

1、质粒构建原理和过程？

质粒构建是分子生物学研究中最常用的实验技术。原理依赖于限制性核酸内切酶，DNA连接酶和其他修饰酶的作用，分别对目的基因和载体DNA进行适当切割和修饰后，将二者连接在一起，再导入宿主细胞，实现目的基因在宿主细胞内的正确表达。

过程如下：

1. PCR扩增

首先要对目标片段进行扩增富集。PCR 即聚合酶链式反应，它是一种用于扩增复制特定 DNA 片段的常用分子生物学技术。其特点是能将微量的 DNA 大幅扩增，在克隆前获得大量的目标基因片段。

简要步骤：利用引物设计软件如 Primer 5 或 NCBI Primer-BLAST 在线设计引物并合成后，配制 PCR 反应体系：将模板、引物、dNTP酶、反应缓冲液和 ddH₂O 按比例加入，加好后轻微瞬离，放入 PCR 仪中扩增目的片段，扩增后通过琼脂糖凝胶检测目的片段大小是否正确。

2. 酶切连接

获得目标片段后，要交到载体中，必须借助两个工具来实现——酶切工具（限制性内切酶）和连接工具（DNA 连接酶）。

简要步骤：配制琼脂糖凝胶（常用浓度 1-2%）后点样，切胶电泳回收目的片段，选择合适的内切酶将目的片段和质粒载体同时切割，酶切后的片段再次电泳回收，测定浓度后按比例加入 T4 DNA 连接酶，粘性末端载体、目的片段、缓冲液，进行连接后直接转化。

质粒是必须进入受体细胞的，它不仅是目的基因的载体，也是目的基因能够在受体细胞中稳定遗传的工具。

把目的基因重组到质粒上主要也是为了能够让其在受体细胞中稳定遗传，因为单独的目的基因无法再受体细胞中稳定遗传到子代中去，而质粒可以很好地起到一个随核基因一块复制和分配到各代子细胞中去的作用

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