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噬菌粒载体构建,简述λ噬菌体载体工作原理及步骤

噬菌粒载体构建,简述λ噬菌体载体工作原理及步骤

大家好,今天小编关注到一个比较有意思的话题,就是关于噬菌粒载体构建的问题,于是小编就整理了5个相关介绍噬菌粒载体构建的解答,让我们一起看看吧。

  1. pBG-2是什么载体,基因工程制药常用的载体有哪些,这些载体的区别是什么...
  2. 什么是噬菌粒?
  3. M13噬菌体载体与噬菌质粒有何不同?
  4. 为什么构建基因文库
  5. 噬菌粒载体是由噬菌体和质粒载体重组而成的么

1、pBG-2是什么载体,基因工程制药常用的载体有哪些,这些载体的区别是什么...

在基因工程重组DNA技术中将DNA片段(目的基因)转移至受体细胞的一种能自我复制的DNA分子。三种常用的载体是质粒、λ噬菌体的衍生物和动植物病毒,最常用的是质粒。

质粒、噬菌体、病毒载体。质粒:质粒是环状双链DNA分子,常见于细菌细胞内,也可通过人工方法导入其他生物体内。噬菌体:噬菌体是一种侵袭细菌的病毒,有高效表达和克隆扩增外源基因的能力。

基因工程载体是能将分离或合成的基因导入细胞的DNA分子,有质粒DNA、病毒DNA、科斯质粒三种主要类型的载体。按人们的意愿去有目的地改造,创建生物遗传性,因此其最基本的工程就是要得到目的基因或核酸序列的克隆。

最常用)、病毒,其作用是把目的基因送入受体细胞;主动运输载体是指细胞膜上的载体蛋白,控制小分子物质跨膜运输、进出细胞。从化学成分上来看:基因工程常用载体——质粒,成分为DNA;主动运输载体成分是蛋白质。

现在所用的运载体主要有两类:一类是细菌细胞质的质粒,它是一种相对分子质量较小、独立于染色体DNA之外的环状DNA(一般有1~200 kb左右,kb为千碱基对),有的一个细菌中有一个,有的一个细菌中有多个。

2、什么是噬菌粒?

组成不同。表达载体:表达载体四部分:目的基因、启动子、终止子、标记基因。载体:常见的载体有质粒、噬菌粒、酵母人工染色体。

是一种质粒载体。下图是它的结构。常用载体有:质粒载体,噬菌体载体,M13噬菌体载体,柯斯质粒载体,噬菌粒载体。

虽然噬菌粒载体携带有M13的IG区,能够合成单链DNA,但是它没有M13的功能基因,没有M13基因2的产物存在,所以不能合成单链DNA。

如噬菌粒载体具有噬菌体的高效性和质粒载体系统可以利用蓝白斑筛选的便利;④cDNA的分子克隆:cDNA连入载体,转化重组体,扩增;⑤对构建的cDNA文库进行鉴定,测定文库包含的克隆数,评价文库质量。

在载体上插入合适大小的 外源DNA片段,并注意不能破坏载体的自我复制性质。组成不同 表达载体:表达载体四部分:目的基因、启动子、终止子、标记基因。克隆载体:常见的载体有质粒、噬菌粒、酵母人工染色体。

3、M13噬菌体载体与噬菌质粒有何不同?

概念不同 质粒是细菌、酵母菌和放线菌等生物中染色体(或拟核)以外的DNA分子。载体:某些能传递能量或运载其他物质的物质。

克隆的片段大:M13噬菌体的DNA在包装时不受体积的限制,所以容载能力大。有报道,有些噬菌体颗粒可以包装比野生型丝状噬菌体DNA长6~7倍的DNA(插入片段可达40kb)。

M13噬菌体是一种独特的载体系统,它只能侵袭具有F基因的大肠杆菌,但不裂解寄主菌。M13DNA(RF)在寄主菌内是双链环状分子,象质粒一样自主复制,制备方法同质粒。

增殖不同 λ噬菌体是一种温和噬菌体,它通过尾管将基因组DNA注入大肠杆菌,其蛋白质外壳留在菌外。进人细菌后的DNA以两端12bp互补单链黏性末端连成双链环状,能以两种不同的方式增殖。

4、为什么构建基因文库

基因文库是指一个包含了某一生物体全部dna序列的克隆群体。目的:当我们要对某一基因结构和功能进行研究时,首先要获得此基因,最简便的方法就是直接从基因文库中获取。

由于噬菌体头部包装容量的限制,重组λ-DNA分子大小只能在39—52kb之间。(3). 黏粒文库 黏粒(cosmid)也称柯斯质粒,是人工构建的由λ噬菌体的COS序列、质粒的复制子序列及抗生素抗性基因序列组合而成的一类特殊的质粒载体。

基因文库将已知DNA切成片段,用来筛选目标基因的。

基因文库制备是指将DNA分子进行片段切割、连接,构建起一个完整的DNA序列库。这个库可以是一个基因组的完整序列,也可以是由特定基因序列构成的部分序列。

所以必须构建基因文库,使得高丰度与低丰度的基因都能被覆盖并检测到。最后,理论上,可以直接提取,但是实际和理论是由很大差异的。所以人们才构建许多方法以达到要求。所以不能光因理论可行,就忽略实际情况。

5、噬菌粒载体是由噬菌体和质粒载体重组而成的么

噬菌质粒是噬菌体M13的基因间隔区(内含有M13的复制起点)插入到细菌质粒载体中构建而成的质粒。噬菌粒在大肠杆菌细胞内以质粒的复制起点进行复制,产生双链DNA。

在构建基因文库时,不同的重组噬菌体DNA经过裂解生长过程最终形成大量的噬菌斑,这些噬菌斑的集合,就构成了基因文库,用λ噬菌体载体构建基因文库时,文库是以噬菌斑的形式存在的,而质粒载体构建的文库是以菌落的形式存在的。

噬菌粒(phagemid)实际上是带有丝状噬菌体大间隔区的质粒载体,是集质粒和丝状噬菌体的有利特征于一身的载体,具有ColEI复制起点及抗生素抗性选择标记的质粒,以及丝状体噬菌体的间隔区。

质粒和噬菌体载体只能在细菌中繁殖,不能满足真核DNA重组需要。感染动物的病毒可改造用作动物细胞的载体。由于动物细胞的培养和操作较复杂、花费也较多,因而病毒载体构建时一般都把细菌质粒复制起始序列放置其中。

质粒(Plasmid),主要指人工构建的质粒。(2) 噬菌体的衍生物。(3) cosmid(柯斯质粒)。(4) 单链DNA噬菌体M13。(5) 动物病毒。

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