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构建基因文库时不需要载体-构建基因文库需要载体吗

构建基因文库时不需要载体-构建基因文库需要载体吗

大家好,今天小编关注到一个比较有意思的话题,就是关于构建基因文库时不需要载体的问题,于是小编就整理了5个相关介绍构建基因文库时不需要载体的解答,让我们一起看看吧。

  1. 构建基因组文库需要用到哪些载体
  2. 为什么要构建基因文库直接从含目的基因的生物体内提取不行吗
  3. 构建基因文库需要使用受体菌群体储存基因
  4. 构建基因组文库时非编码区需要导入受体细胞吗
  5. 为什么要构建基因文库?直接从含有目的基因的生物体内提取不行吗?

1、构建基因组文库需要用到哪些载体

文库的构建是将基因片段装载到一个载体中(质粒载体、噬菌体载体或者人工染色体),然后转化大肠杆菌、酵母或者噬菌体来构建的,而不是单单拿cdna或者dna片段(鸟枪法)来构建的。

质粒载体可用于生物cDNA文库构建。但只适合于高丰度的mRNA。(2). 噬菌体文库 目前用于基因克隆的噬菌体载体及其衍生载体很多,如单链的M13噬菌体载体、λ噬菌体载体、P1噬菌体载体、噬菌粒(phagemid或phasmid)等。

一般我们用λ噬菌体或者柯斯质粒作为载体,和需要构建基因组的外源DNA重组,得到的重组体感染大肠杆菌进行增殖得到克隆库即基因文库。

在基因组中有1—2个筛选标记,为寄主细胞提供易于检测的表型特征。(4) 分子量要小,多拷贝,易于操作。

一般情况下,置换型载体克隆外源片段的大小范围是923kb,故而该载体主要用来构建基因组文库。

2、为什么要构建基因文库直接从含目的基因的生物体内提取不行吗

构建基因文库的意义不只是使生物的遗传信息以稳定的重组体形式贮存起来,更重要的是它是分离克隆目的基因的主要途径。

当然不能直接提取。基因是一个人为概念,但从分子角度上看,基因与非基因没有分子水平的差异。而我们要操作分子,必须找到目标靶序列。所以,不可能直接提取任何一个基因,只能通过探针或者其他方式找到基因,并作相应的处理。

基因文库是指一个包含了某一生物体全部DNA序列的克隆群体。目的:当我们要对某一基因结构和功能进行研究时,首先要获得此基因,最简便的方法就是直接从基因文库中获取。

一些生物还有可能灭绝,无法获取DNA,建立基因文库可以有效避免这一问题。除此之外 ,可以从基因文库中提取基因,非常简便,非常有利于后续的基因编辑操作,省时省力。因此,建立基因文库是一个很好的,保存DNA的一种方法。

3、构建基因文库需要使用受体菌群体储存基因

基因文库:将含有某种生物不同基因的许多DNA片段,导入受体菌的群体中储存,各个受体菌分别含有这种生物的不同基因,称为基因文库。基因组文库:包含了一种生物所有基因的基因文库叫做基因组文库。

基因组文库的构建的定义:某种生物基因组的全部遗传信息通过克隆载体储存于某一受体菌的群体中,这个群体就称为该生物基因组的文库。

从基因文库中获取目的基因:将含有某种生物的许多基因片段,导入受体菌的群体中储存,各个受体菌分别含有这种生物不同的基因,称为基因文库。

从基因文库中获取:(1)基因文库:将含有某种生物不同基因的许多DNA片段,导入受体菌的群体储存,各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因,称为基因文库。(2)基因文库的种类:基因组文库;部分基因文库。

当目的基因的序列已知时:用化学方法合成目的基因,或用聚合酶链式反应(PCR)扩增目的基因。将含有某种生物的许多DNA片段,导入受体菌的群体中储存。各个受体菌分别含有这种生物不同的基因,称为基因文库。

4、构建基因组文库时非编码区需要导入受体细胞吗

需要,用噬菌体作为运载体,是利用噬菌体的侵染性,将目的基因导入受体细胞,这一步骤相对比较容易,不象用质粒作载体,要用土壤农杆菌转化或用基因枪轰入等难度大些。

导入受体细胞(例如细菌)并进行克隆,就成为cDNA基因文库。由于构建cDNA基因文库时,采用的是总mRNA,所以该基因文库拥有同各种mRNA分子相应的DNA克隆。cDNA基因文库具有多种优越性:(1)对它的筛选比较简单易行。

构建基因组文库的步骤A 分离基因组DNA;B 用超声波或限制酶等进行基因组DNA部分或完全降解;C 将降解物进行分级得到所需大小DNA片段;D 将DNA片段与载体连接(一般用λ噬菌体载体);E 将重组体导入宿主细胞;F 最后筛选鉴定重组子克隆。

标记基因只是检测目的基因是否导入了受体细胞。

基因工程中,外源基因一定要加到运载体上才能导入受体细胞。如果不加到运载体上,一方面不能保证导入的基因表达,另一方面,极有可能被受体细胞水解掉。所以基因工程中都是将目的基因加到运载体上才导入受体细胞。

5、为什么要构建基因文库?直接从含有目的基因的生物体内提取不行吗?

当然不能直接提取。基因是一个人为概念,但从分子角度上看,基因与非基因没有分子水平的差异。而我们要操作分子,必须找到目标靶序列。所以,不可能直接提取任何一个基因,只能通过探针或者其他方式找到基因,并作相应的处理。

理论上是可以,但是很麻烦;首先取得目的基因后的扩增,转入受体细胞等操作都需要载体。目的基因片段是无法直接在其他细胞内表达的;当然还有很多的问题。

基因文库是指一个包含了某一生物体全部DNA序列的克隆群体。目的:当我们要对某一基因结构和功能进行研究时,首先要获得此基因,最简便的方法就是直接从基因文库中获取。

一些生物还有可能灭绝,无法获取DNA,建立基因文库可以有效避免这一问题。除此之外 ,可以从基因文库中提取基因,非常简便,非常有利于后续的基因编辑操作,省时省力。因此,建立基因文库是一个很好的,保存DNA的一种方法。

但对真核细胞来说,从基因组DNA文库获得的基因与从cDNA文库获得的不同。

到此,以上就是小编对于构建基因文库时不需要载体的问题就介绍到这了,希望介绍关于构建基因文库时不需要载体的5点解答对大家有用。

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