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1. 如何将表达载体转入农杆菌
2. ...1.目的基因表达载体构建完成后,怎么送回农杆菌里
3. 农杆菌转化法的过程

1、如何将表达载体转入农杆菌

质粒可以独立复制，也可以整合到细胞的核DNA中，随着核DNA的复制而复制。3农杆菌的T-DNA会插入到植物的染色体上的DNA中。因为插入位点是随机的，可能会插入到一些植物生长所必须的基因当中，以及转化没成功的那些都要筛选掉。

载体转入农杆菌中的方法比较多，大多是先将农杆菌制备成感受态细胞，方法可以参考大肠杆菌感受态制备，或者按照王关林的《植物基因工程》中有详细的制备方案。

获取目的基因：用限制性核酸内切酶切割下目的基因。基因表达载体的构建：将目的基因与载体（大多数选用质粒）用DNA连接酶连接起来。将目的基因导入受体细胞：将含目的基因的重组质粒导入农杆菌（农杆菌为受体细胞）。

．基因表达载体的构建：将目的基因与载体（Ti质粒）用DNA连接酶连接起来。3．将重组DNA分子导入农杆菌：将含目的基因的重组质粒导入农杆菌， 此农杆菌和提供Ti质粒的农杆菌应该不同。

获得目的基因：用限制性内切酶切割目的基因。基因工程示意图。基因表达载体的构建：目的基因与载体（多为质粒）通过DNA连接酶连接。

2、...1.目的基因表达载体构建完成后,怎么送回农杆菌里

农杆菌的T-DNA会插入到植物的染色体上的DNA中。因为插入位点是随机的，可能会插入到一些植物生长所必须的基因当中，以及转化没成功的那些都要筛选掉。脱分化形成愈伤组织再诱导再分化形成丛芽或胚状体最后发育成完整个体。

获取目的基因：用限制性核酸内切酶切割下目的基因。基因表达载体的构建：将目的基因与载体（大多数选用质粒）用DNA连接酶连接起来。将目的基因导入受体细胞：将含目的基因的重组质粒导入农杆菌（农杆菌为受体细胞）。

获得目的基因：用限制性内切酶切割目的基因。基因工程示意图。基因表达载体的构建：目的基因与载体（多为质粒）通过DNA连接酶连接。

要通过农杆菌完成转化，首先要将目的基因导入农杆菌。用钙离子处理农杆菌，使农杆菌成为感受态，容易吸收外界环境的DNA，从而完成转化。

．基因表达载体的构建：将目的基因与载体（Ti质粒）用DNA连接酶连接起来。3．将重组DNA分子导入农杆菌：将含目的基因的重组质粒导入农杆菌， 此农杆菌和提供Ti质粒的农杆菌应该不同。

3、农杆菌转化法的过程

农杆菌转化法详细过程如下：获得目的基因：用限制性内切酶切割目的基因。基因工程示意图。基因表达载体的构建：目的基因与载体（多为质粒）通过DNA连接酶连接。

农杆菌转化法的过程如下：转化：目的基因插入Ti质粒的T-DNA上--进入农杆菌--导入植物细胞--目的基因整合到植物染色体的DNA上--目的基因得以稳定维持和表达。获取目的基因：用限制性核酸内切酶切割下目的基因。

整个转基因体系的建立步骤大致可以归纳为：基因表达载体的构建－载体的农杆菌转化－农杆菌与植株共培养－转化植株的筛选－转化植株的鉴定。在每一步中都涉及到很多的方法与技术。

农杆菌培养至适当浓度。受体材料消毒处理并切成适当大小组织块。组织块浸泡于菌液中适当的时间。浸泡过的组织块放于共培养基上培养。组织块转移到筛选培养基上培养，选出阳性幼苗。

⑦ 置液氮中10 s，放入-20℃冰箱中保存备用。

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