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1. 基因原核表达的详细过程
2. 基因表达载体是如何构建的呢
3. 植物表达载体构建的全过程?
4. 4、构建重组DNA分子时,目的基因与载体连接可能出现几种结果?为什么?
5. 基因工程里基因表达载体的构建这一步会得到多种连接产物,是否要进行筛 ...

1、基因原核表达的详细过程

Operon操纵子：一个或几个结构基因与一个调节基因和一个操纵基因，加上启动子构成一个操纵单元，这个单元称为操纵子。

复制：基因在解旋酶作用下解旋并以解旋后的两条链为模版以游离脱氧核糖核酸为原料，在DNA聚合酶作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA子链。转录：基因在解旋酶作用下解旋。

说起来容易做起来就要摸索了，基本步骤：目的基因的扩增→载体与目的基因双酶切→电泳→割胶回收→目的基因与载体的连接反应→重组体筛选→验证重组体→转化入大肠杆菌进行表达。

从技术上常用的流程大概就是：①目的基因连接上载体，②将载体（通常为质粒）转染细菌，③培养并富集目的细胞，④检验表达效率。

基因的表达过程如下：第一个过程，转录：以一条DNA链为膜板合成一条mRNA，此过程在细胞核内完成后，mRNA通过核孔进入细胞质。

2、基因表达载体是如何构建的呢

构建基因表达载体 DNA的分子链被切开后，还得缝接起来以 5年，科学家们在1967完成基因的拼接。 个实验室里几乎同时发现并提取出一 种酶，这种酶可以将两个DNA片段连接起 年以1974来，修复好DNA链的断裂口。

通过载体把目的基因片段导入活细胞。构建基因表达载体也就是把目的基因和载体连接，使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用。

首先要用一定的限制酶切割质粒，使质粒出现一个缺口，露出黏性末端。用同一种限制酶切断目的基因，使其产生相同的黏性末端。

基因表达载体的构建，即目的基因与运载体结合，是实施基因工程的第二步，也是基因工程的核心，其构建目的是使目的基因能在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时，使目的基因能够表达和发挥作用。

标记基因：用于检测是否已经植入目的基因。植入的成功率其实很低，所以有必要选出已经植入的个体。比如抗虫棉，判断是否植入，用种植后让虫子吃的方法判断周期太长。

3、植物表达载体构建的全过程?

构建基因表达载体的步骤不论动植物都是一样的。首先需要用工具酶剪切运载体上的DNA分子，然后用DNA连接酶将目的基因与被被切割的DNA分子连接。在这里的运载体有一定的要求，倘若不清楚可以追问。

载体构建：将目的基因通过酶连接到一个特定质粒分子上，构成一个插入目的片段的新的质粒分子。 遗传转化：最简单的花序浸染，常用的农杆菌转化、基因枪轰击，还有花粉管通道等。

载体构建目的 ①用它作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞中去。②利用他在宿主细胞内对目的基因进行大量的复制（称为克隆）。理想的运载体是质粒（plasmid），在基因工程中，常用人工构建的质粒作为载体。

在一个典型的转基因植物生产过程中，这些步骤分别称为目的基因克隆、载体构建、转化、重组，以及筛选。基因克隆必须得有这个需要被转的基因。现在最广泛使用的BT蛋白基因和抗草甘膦基因，就来自于两种细菌。

4、4、构建重组DNA分子时,目的基因与载体连接可能出现几种结果?为什么?

重组DNA分子的过程中，大量载体和目的基因在一起，可能会产生三种重组分子，包括载体与载体，载体与目的基因，目的基因与目的基因的三种重组DNA分子。

单酶切平端， 粘端： 可能有目的基因自连，载体自连，目的基因与载体连接。双酶切平端：可能有目的基因自连，载体自连，目的基因与载体连接。 双酶切粘端： 理论上只可能是目的基因与载体连接。

如果只能是目的基因和载体连接到一起，那么最后产生的就是目的基因和载体这唯一的一种情况；但现在的情况是，没有要求他们怎样重组，所以他们自身和自身之间也可能形成新的重组DNA，只不过他们不起作用而已。

构建过程中需要限制核酸内切酶、DNA连接酶和运载体三种工具。只考虑两两结合的话，产生3种重组DNA分子，即目的基因和目的基因、运载体和运载体、目的基因和运载体结合形成的重组DNA分子。

5、基因工程里基因表达载体的构建这一步会得到多种连接产物,是否要进行筛 ...

分：就是从生物体内提取基因组，经过限制性内切酶酶切或PCR扩增分离出目的基因（你所需要的目的片段）切：比如将环形质粒切成线性，方便做转化。连（练）：就是利用大肠杆菌连接酶或T4 DNA连接酶将载体与目的基因连接。

目的基因制备和分离：一般通过文库筛选、同源序列比对等方法进行克隆。2）DNA重组载体的构建：选择植物表达载体，根据载体选择或添加酶切位点，然后进行酶切连接，构建重组载体。

这样一来，如果构建成功，就会破坏了原来位于该“特定启动子”和“终止子”之间的四环素抗性基因，即“目的基因－载体连接物”不具有四环素抗性。

基因工程是否成功就是看基因能否被成功表达，如果把表达载体用带有荧光或放射性的元素标记上，那么表达载体一旦被发现，就表明基因能成功转录翻译。

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