载体构建有几种载体-载体构建有几种载体类型

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这种工程的常见载体是质粒。在基因工程中三种常用的载体是质粒、λ噬菌体的衍生物和动植物病毒，最常用的是质粒。在基因操作过程中使用运载体有两个用途：一是用它作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞中去。

基因工程中常用的载体主要有：① 质粒（ plasmid ）载体；② 噬菌体载体；③ 病毒载体；④ 上述载体相互组合或与其他基因组 DNA 组合成的载体。这些载体可分为克隆载体和表达载体，其中表达载体又分胞内表达和分泌表达两种。

C病毒。还有质粒、噬菌体，他们的基因序列易于整合到别的基因上，有单独的复制子，可以实现自我扩增。

质粒。质粒是小型环状DNA，因为可以自我复制、具有标记基因、有限制酶切割位点、对受体细胞无害。是基因工程中常用的载体。

常用噬菌体载体有单链噬菌体M13系统；双链噬菌体系统。噬菌体应和相应的宿主细胞配合使用。以上载体各有特点，便于选择，灵活应用。

【答案】：A、C、D 常用的克隆载体有三类：质粒、λ噬菌体和DNA病毒。

性质不同表达载体：生物学中，基因工程的基本操作，表达载体（Expression vectors）就是在克隆载体基本骨架的基础上增加表达元件（如启动子、RBS、终止子等），使目的基因能够表达的载体。

克隆载体：能在宿主细胞中复制繁殖，而且最好要有较高的自主复制能力；容易进入宿主细胞，而且进入效率越高越好；容易从宿主细胞中分离纯化出来，这才便于重组操作。

为利用根癌农杆菌的Ti质粒，发展了一元载体系统和双元载体系统。

目的基因克隆载体：其功能是保存和克隆目的基因。与微生物基因工程相似，通常是由多拷贝的E. Coli小质粒为载体。（2）中间克隆载体：是构建中间表达载体的基础质粒。

三种常用的载体是质粒、λ噬菌体的衍生物和动植物病毒，最常用的是质粒。

载体的分类质粒载体质粒载体，相对分子质量较小、独立于染色体DNA之外的环状DNA（一般有1～200 kb左右，kb为千碱基对），有的一个细菌中有一个，有的一个细菌中有多个。

①用它作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞中去。②利用他在宿主细胞内对目的基因进行大量的复制（称为克隆）。理想的运载体是质粒（plasmid），在基因工程中，常用人工构建的质粒作为载体。

载体构建：将目的基因通过酶连接到一个特定质粒分子上，构成一个插入目的片段的新的质粒分子。遗传转化：最简单的花序浸染，常用的农杆菌转化、基因枪轰击，还有花粉管通道等。

载体构建的方法：将外源DNA片段与线性化的质粒进行连接，形成重组质粒。使用适当的转化方法将构建好的质粒转化到目标细胞中，使其能够进入细胞内。

转化：利用农杆菌介导转化或基因枪等方法，将含有目标基因的载体导入大白菜的叶片、组织或胚胎。再生：利用植物组织培养技术，培养转基因组织并再生成整株植物。

基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。

文库的构建是将基因片段装载到一个载体中（质粒载体、噬菌体载体或者人工染色体），然后转化大肠杆菌、酵母或者噬菌体来构建的，而不是单单拿cdna或者dna片段（鸟枪法）来构建的。

质粒载体可用于生物cDNA文库构建。但只适合于高丰度的mRNA。（2）．噬菌体文库目前用于基因克隆的噬菌体载体及其衍生载体很多，如单链的M13噬菌体载体、λ噬菌体载体、P1噬菌体载体、噬菌粒（phagemid或phasmid）等。

一般我们用λ噬菌体或者柯斯质粒作为载体，和需要构建基因组的外源DNA重组，得到的重组体感染大肠杆菌进行增殖得到克隆库即基因文库。

在基因组中有1—2个筛选标记，为寄主细胞提供易于检测的表型特征。（4）分子量要小，多拷贝，易于操作。

一般情况下，置换型载体克隆外源片段的大小范围是923kb，故而该载体主要用来构建基因组文库。

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