大家好，今天小编关注到一个比较有意思的话题，就是关于在载体上构建两个基因片段的问题，于是小编就整理了5个相关介绍在载体上构建两个基因片段的解答，让我们一起看看吧。

1. 我想要把两段基因放在同一载体上,但是在体内分别表达,那么这两端基因怎...
2. 如何将两个基因构建到同一个载体上
3. 如何将两个基因构建到同一个载体上
4. 大片段载体的分段构建二(两步PCR法)
5. 构建表达载体时,两个基因之间要间隔多少序列

1、我想要把两段基因放在同一载体上,但是在体内分别表达,那么这两端基因怎...

还可以用SOE-PCR法将两基因连到一起，但你要考虑载体启动子的问题，可能由于融合基因构象或启动子能力的问题无法正确表达。你可以设计双启动子。

两个互补粘性末端用连接酶连接，两个平末端用DNA聚合酶连接，两个非互补粘性末端用DNA聚合酶一边补平一边连接。

共转染就是把2种以上的质粒同时转染到同一个细胞。谁告诉你“但是质粒不相容啊，可以转两个质粒到同一细胞吗？”这个概念的？完全错误。

如基因型为AaBb的个体，就只能产生AB，ab两种配子。两对基因不在同一对染色体上，是指这两对基因分别在两对同源染色体上，在产生配子时遵循基因的自由组合定律。如基因型为AaBb的个体，就能产生AB，Ab，aB，ab四种配子。

2、如何将两个基因构建到同一个载体上

还可以用SOE-PCR法将两基因连到一起，但你要考虑载体启动子的问题，可能由于融合基因构象或启动子能力的问题无法正确表达。你可以设计双启动子。

既然要分别表达，则这两个基因应该有完整的表达元件，即：各自的启动子、终止子和翻译起始与终止元件。具有上述完整元件的基因连接在一起即可。

gateway载体一般都是含有两个交换位点attL1和attL2，这两个位点和入门载体上的attR1和attR2的交换位点分别进行重组，从而将目的基因插入到表达载体中。从这个角度来看，很难有可以插入两个基因的gateway载体。

http：//wenku.baidu.com/view/4f0d814afe4733687e21aa1d.html 当然，你把2个序列同时克隆到一个质粒也可以。可以用2个启动子分别驱动，或者串在一起，中间用核糖体结合序列相连，这样翻译的时候可以保证2者都得到翻译。

保证核糖体结合位点后的第一个ATG与目的基因是间隔3的倍数个碱基。

3、如何将两个基因构建到同一个载体上

还可以用SOE-PCR法将两基因连到一起，但你要考虑载体启动子的问题，可能由于融合基因构象或启动子能力的问题无法正确表达。你可以设计双启动子。

既然要分别表达，则这两个基因应该有完整的表达元件，即：各自的启动子、终止子和翻译起始与终止元件。具有上述完整元件的基因连接在一起即可。

gateway载体一般都是含有两个交换位点attL1和attL2，这两个位点和入门载体上的attR1和attR2的交换位点分别进行重组，从而将目的基因插入到表达载体中。从这个角度来看，很难有可以插入两个基因的gateway载体。

http：//wenku.baidu.com/view/4f0d814afe4733687e21aa1d.html 当然，你把2个序列同时克隆到一个质粒也可以。可以用2个启动子分别驱动，或者串在一起，中间用核糖体结合序列相连，这样翻译的时候可以保证2者都得到翻译。

4、大片段载体的分段构建二(两步PCR法)

首先一下是基因的全长，根据预实验结果，在红线那个位置分隔开，将其分成1-3010的 a 段及3011-6810的 b 段两个片段。一般来说4kb以下还是很好构建的。

步骤不同：两步法退火和延伸同时在60℃-65℃间进行，以减少一次升降温过程，而三步法则分两次完成。用时不同：两步法减少一次升降温过程，提高了反应速度，用时较短。而三步法则比两步法用时更长。

PCR的技术的主要步骤：DNA变性：（90℃-96℃）：双链DNA模板在热作用下，氢键断裂，形成单链DNA。退火：（60℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链。

设计一对引物，针对基因两端（覆盖酶切位点），在上游引物中酶切位点后的一段序列中添加一个碱基，扩增以后，酶切产物和空载体，再连接一遍，转化，小提拿去测序。

5、构建表达载体时,两个基因之间要间隔多少序列

保证核糖体结合位点后的第一个ATG与目的基因是间隔3的倍数个碱基。

完整的表达载体必须包括：复制子，在细菌中扩增时所必须。启动子，目的基因在细菌或细胞中转录所必须，转录了才能翻译，是谓“表达”。原核筛选标记，细菌增菌所必须。

重组表达质粒经EcoRI和KpnI双酶切后能产生出327bp、4980bp大小的两个片段，序列分析表明重组表达质粒包含人resistin基因完整编码区，基因编码无移位，PAGE凝胶电泳表明在细菌裂解上清有分子质量为35kD的融合蛋白。

然后在顺反式片段之间插人一段中间间隔序列以增强基因沉默效果，最后将表达载体和RNA干扰片段相连接，形成可用于遗传转化的RNA干扰表达载体。

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