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1. 双元载体如何赋予植物对某种抗生素的抗性?
2. 双元表达载体系统的原理
3. ...我们构建了含有35s启动子:HD1-GFP的双元载体

1、双元载体如何赋予植物对某种抗生素的抗性?

必须具有可使用的标记基因，例如报告基因，以帮助确定转基因植物是否表达目的基因。pCAMBIA2300是一种常用的植物表达双元载体，其骨架是pUC18。pCAMBIA2300无gus报告基因，但含有卡那霉素抗性基因。

⑴ 双元载体的构建及工程菌株的制备 将具有合适真菌启动子的筛选标记基因插入到T-DNA的左边界和右边界之间， 然后把构建好的双元载体 （binary vector） 通过冻融法等方法导入A.tumefaciens中。

抗性基因本身应该是从对抗生素具有特异抗性的细菌的基因组中得到的，分子克隆中很常用，所以基本上质粒载体上都已经构建了。功能是作为载体成功转入的标记。

产生 物质，比如 具有“抗生素基因”的微生物就能生产“抗生素”，而具有“胰岛素基因”的细胞就能分泌“胰岛素”。。具有***抗性基因就说明能够 抵抗 物质。

2、双元表达载体系统的原理

双元载体系统的构建的原理是Ti质粒上的Vir基因可以反式激活T－DNA 的转移。

双元载体系统的构建的原理是Ti质粒上的Vir基因可以反式激活T－DNA的转移。与共整合载体所不同的是，它不依赖两个质粒之间的同源序列，不需要共整合过程就能在农杆菌内独立复制。

农杆菌转化法的原理是构建双元表达载体系统，由两种质粒组成，一种是位于大肠杆菌中的穿梭质粒，另一种是位于农杆菌中的辅助性质粒。

双元表达载体系统其实是一个质粒，它包含两个部分，一个部分是能够被转移的T-DNA，另一个是能够帮助T-DNA转移的Vir区。

3、...我们构建了含有35s启动子:HD1-GFP的双元载体

通常我们是先将外源基因插入带有筛选标记的载体，然后将此载体上的35S promoter-expression gene-gfp这段全部切下，然后构建亚克隆，其过程就是将上述的片断插入双元载体的LB和RB之间，其插入方向是可以任意的。

农杆菌转化法的原理是构建双元表达载体系统，由两种质粒组成，一种是位于大肠杆菌中的穿梭质粒，另一种是位于农杆菌中的辅助性质粒。

双元载体（binary vector）系统是指由两个分别含T-DNA和Vir区的相容性突变Ti质粒构成的系统。其中之一是含有T-DNA转移所必需的Vir 区段质粒，它缺失或部分缺失T-DNA序列。

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