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1. PET-29A载体中酶切位点怎么选择
2. 载体构建酶切位点的问题
3. bamh1酶切位点是什么

1、PET-29A载体中酶切位点怎么选择

看你要插入的序列片段张是否有相同的酶切位点。

AMP是可以插入的，方法有很多，比如酶切，比如overlapping PCR，不过还是建议用卡那霉素筛选，蓝白斑也可以的。有lacI可以弄蓝白斑的。

酶切位点的选择一定是要避开目标片段内包含的位点，因为如果不避开到时候酶切就会把目的片段切开。在目的片段和载体之间的酶切位点都是扩增引物带入的。

可以通过PCR技术对载体上的一个酶切位点进行定点突变，即可达到目的。

酶切位点需要存在于MCS中，但同时不能存在于目的基因序列中。两个酶切位点之间至少要有几个碱基间隔，不能紧邻或重叠。最好选择成熟的内切酶。

2、载体构建酶切位点的问题

酶切位点的距离太小（小于10bp），影响限制性内切酶对切点的识别，不利于空载体的双酶切。

IN-FUSION克隆技术的缺点：载体和基因内部酶切位点的局限性、非特异性扩增的可能性、长片段连接效果差、大规模载体构建困难。

不同酶切位点所需要的保护碱基是不一样的，一般参考NEB网站上的一个保护碱基表。一搜就有了。如果不做PCR产物酶切而是直接连接T载体，就可以不加保护碱基，PCR结束后直接加A连T，然后按流程操作就可以了。

酶切位点有些基因里面有，有些基因里面没有，不一定的。现在基因工程里面，利用酶切位点可以方便地把基因切下来装上去，以此来改造质粒载体。所以质粒载体上都会故意留着酶切位点，或者在基因两端人为地加上酶切位点。

这是重组DNA实验中常采用的一种筛选重组体的方法：在四环素抗性基因中有一个酶切位点，那么外源的DNA一旦插入到这个位点上。

3、bamh1酶切位点是什么

bamh1酶切位点如下：在分子克隆实验中，限制性内切酶是必不可少的工具酶。 无论是构建克隆载体还是表达载体，要根据载体选择合适的内切酶（当然，使用T载就不必考虑了）。先将引物设计好，然后添加酶切识别序列到引物5； 端。

本身功能和结构上没有变化，区别在多克隆位点198位的BamH1酶切位点，pET21a比b多了一个碱基。产生的差异在于在考虑用BamH1的同尾酶构建载体是有区别的，细节的地方你自己再看看吧。

Bamh1的酶切时间是 2-3小时。Bamh1是一种限制性内切酶。

④ 分析载体质粒的酶切位点，这里用pLvx-puro作为目的基因的载体 因此，BamHEcoR1不可使用，其他可用的有：XhoBsyBApal、Smal、Xbal 酶切的选择还需要考虑现实情况，我们组内有现货的酶： Xho1， Xbal。

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