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1. 基因回补实验载体有哪些类型?
2. 在基因沉默中为什么要构建反向载体?还有就是基因沉默中双链的RNA是怎样...
3. α-互补在载体构建中有何作用
4. 构建基因表达载体的目的

1、基因回补实验载体有哪些类型?

载体的分类 质粒载体 质粒载体，相对分子质量较小、独立于染色体DNA之外的环状DNA（一般有1～200 kb左右，kb为千碱基对），有的一个细菌中有一个，有的一个细菌中有多个。

在基因工程重组DNA技术中将DNA片段（目的基因）转移至受体细胞的一种能自我复制的DNA分子。三种常用的载体是质粒、λ噬菌体的衍生物和动植物病毒，最常用的是质粒。

噬菌体载体。柯斯质粒载体。质粒载 pBR322。载体（Vector） ，指在基因工程重组DNA技术中将DNA片段（目的基因）转移至受体细胞的一种能自我复制的DNA分子。三种最常用的载体是细菌质粒、噬菌体和动植物病毒。

根据来源：质粒载体、噬菌体载体、病毒载体、非病毒载体、微环DNA 根据用途：克隆载体、表达载体 根据性质：温度敏感型载体，融合型表达载体、非融合型表达载体。

2、在基因沉默中为什么要构建反向载体?还有就是基因沉默中双链的RNA是怎样...

RNA干扰，简称RNAi，是一种自然的基因沉默机制，通过小分子RNA分子介导的切割过程来特异性地降低目标基因的表达。在vigs基因沉默中，RNA干扰起着重要的作用。

高效性：Elbashir等在研究中发现分别为25 nmol/L与100 nmol/L的起始双链RNA产生的结果是一样的，只是高浓度起始的更有效些。

当外源基因的多拷贝整合到同一座位上，则形成正向或反向重复序列，拷贝数越多，基因沉默就越严重。

RNA反转录的cDNA是单链的，最终形成双链。cDNA是指具有与某RNA链呈互补碱基序列的DNA。与RNA链互补的单链DNA，以其RNA为模板，在适当引物的存在下，由依赖RNA的DNA聚合酶（反转录酶）作用而合成。

3、α-互补在载体构建中有何作用

利用这一互补性质，可用于筛选在载体上插入了外源片段的重组质粒。

α-互补：是根据载体的遗传特征筛选重组子，使用的载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段，其中有β-半乳糖苷酶基因（emphasis：role=italiclacZemphasis）的调控序列和前146个氨基酸的编码信息。

宿主细胞才有β-半乳糖苷酶活性，使特异的底物X-gal变为蓝色化合物，这就是所谓的α-互补，而重组子由于基因插入使α-肽基因失活，不能形成α-互补，在含X-gal的平板上，含阳性重组子的细菌为无色菌落或噬菌斑。

α-互补是基于在两个不同的缺陷 β-半乳糖苷酶之间可实现功能互补而建立的。大肠杆菌的乳糖 lac 操纵子中的 lacZ 基因编码 β-半乳糖苷酶，如果 lacZ 基因发生突变，则不能合成有活性的 β-半乳糖苷酶。

一些载体（如PUC系列质粒）带有β-半乳糖苷酶（lacZ）N端α片段的编码区，该编码区中含有多克隆位点（MCS），可用于构建重组子。这种载体适用于仅编码β-半乳糖苷酶C端ω片段的突变宿主细胞。

4、构建基因表达载体的目的

基因表达载体 的构建的目的：使 目的基因 在 受体细胞 中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用。组成：目的基因 启动子 终止子 标记基因 。

基因表达载体的构建，即目的基因和运载体结合，是实施基因工程的第二步，也是基因工程的核心。其构建目的是使目的基因能在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时，使目的基因能够表达和发挥作用。

通过载体把目的基因片段导入活细胞。构建基因表达载体也就是把目的基因和载体连接，使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用。

尽管构建克隆载体也存在操作复杂（相对于PCR），成功率不是极高，而且还要筛选，但一旦你重组成功并转入了大肠杆菌，你就可以保存了，你想什么时候用，摇个菌，就可以制备到大量的DNA。测序需要。

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