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1. 什么是ORF表达载体?
2. CRISPRa基因过表达技术
3. ORF和cDNA区别

1、什么是ORF表达载体?

表达载体，指在ORF前有转录启动子，ORF后有转录终止子，这样ORF可表达为蛋白质；另有些附加原件，如复制子，筛选标记基因，报告基因等。

接下来是CDS，也就是编码序列，这是外显子的一部分，直接编码蛋白质氨基酸序列。ORF，即开放阅读框，也是一个编码氨基酸的序列，但它不一定是最终的蛋白质产物，因为它可能不包含完整的起始和终止密码子。

ORF克隆 ：一个全长ORF（开放阅读框）克隆，是指一个插入有编码全长 蛋白质 的 DNA 片断的质粒。

不是所有阅读框都能表达出蛋白产物，或者能表达出占有优势或者能产生生物学功能的蛋白。CDS，是编码一段蛋白产物的序列。CDS 必定是一个 ORF。但也可能包括很多 ORF。 反之，每个 ORF 不一定都是 CDS。

2、CRISPRa基因过表达技术

crRNA的全称是CRISPR-derived RNA。CRISPR的意思是基因编辑技术，derived是衍生的，所以看字面意思应该是基因编辑衍生RNA，可能会更简短，那我就不清楚了。

基因定点突破技术是指通过定向改变某个特定基因的碱基序列，来实现基因的修饰、修正或修复的技术。在这个技术的发展历程中，有几个关键的里程碑被认为是其成功的标志。

CRISPR技术起源于细菌和古菌对病毒入侵的免疫防御机制，科学家发现并利用这一机制，发展出一种简便、高效的基因编辑工具。

基本原理 CRISPR簇是一个广泛存在于细菌和古生菌基因组中的特殊DNA重复序列家族，其序列由一个前导区（Leader）、多个短而高度保守的重复序列区（Repeat）和多个间隔区（Spacer）组成。

CRISPR-Cas9是继ZFN、TALENs等基因编辑技术推出后的第三代基因编辑技术，短短几年内，CRISPR-Cas9技术风靡全球， 成为现有基因编辑和基因修饰里面效率最高、最简便、成本最低、最容易上手的技术之一，成为当今最主流的基因编辑系统。

3、ORF和cDNA区别

而ORF克隆就没有那么复杂了，它是cDNA开放阅读框区域的序列，无5； 和3； UTR序列，可直接在宿主细胞中进行表达，更为省时省力。

所以，我们说ORF只是理论上的编码区，与真实的情景可能并不一样。而CDS是检查cDNA后得到的编码组合序列，和实际情景比较接近。

Buffer：主要是用来控制体系的pH和离子，为DNA聚合酶提供最佳工作环境。cDNA：cDNA是逆转录出来的DNA，主要是用来将mRNA变为单链DNA，作为PCR的模板。

cDNA和CDS不是一个概念，后者是编码序列（翻译成氨基酸的序列），当然比其mRNA短了。mRNA还包括5’非翻译区，3’终止区及PolyA尾巴等。cDNA是以mRNA为模板反转录成的DNA，与编码区没关系。

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