怎样构建植物过表达载体-简述植物表达载体类型及用途
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1、怎样构建植物的表达载体,例举所用的目的基因以及构建的载体类型
中间克隆载体:是构建中间表达载体的基础质粒。是由 大肠杆菌质粒插入T-DNA片段、目的基因和标记基因等构建 而成。 (3)中间表达载体:是含有植物特异启动子的中间载体。是 构建转化载体的质粒。
载体构建目的 ①用它作为运载工具,将目的基因转移到宿主细胞中去。②利用他在宿主细胞内对目的基因进行大量的复制(称为克隆)。理想的运载体是质粒(plasmid),在基因工程中,常用人工构建的质粒作为载体。
常用的载体有质粒和病毒。当然载体还有其它作用,如促进目的基因转化、表达等。 质粒是最常用的载体,它通常是DNA环状分子,可以独立地存在于细菌细胞中。
构建植物siRNA表达载体:设计编码产生小分子发卡RNA(hairpin:RNA,hpRNA)的DNA序列,编码hpRNA的DNA各链反向互补,中间加上7个碱基的间隙,将其连接到农杆菌双元载体质粒上,构建植物表达载体。
2、什么是过表达转基因植株的创制?
基因过表达的基本原理是通过人工构建的方式在目的基因上游加入调控元件,使基因可以在人为控制的条件下实现大量转录和翻译,从而实现基因产物的过表达。 基因过表达的步骤是: 1,构建克隆。
当拿到一个基因的DNA片段后,就需要把它导入一个载体,一方面长期保存。另一方面也需要以载体为媒介将基因导入受体细胞中。基因表达载体的构建是基因工程的核心。常用的载体有细菌质粒,噬菌体和动植物病毒。其中质粒载体最常用。
转基因是将人工修饰过过的基因组植入植物中,杂交是植物间自然产生子代植物。
在一个典型的转基因植物生产过程中,这些步骤分别称为目的基因克隆、载体构建、转化、重组,以及筛选。基因克隆必须得有这个需要被转的基因。现在最广泛使用的BT蛋白基因和抗草甘膦基因,就来自于两种细菌。
3、植物表达载体构建的全过程?
构建基因表达载体的步骤不论动植物都是一样的。首先需要用工具酶剪切运载体上的DNA分子,然后用DNA连接酶将目的基因与被被切割的DNA分子连接。在这里的运载体有一定的要求,倘若不清楚可以追问。
载体构建:将目的基因通过酶连接到一个特定质粒分子上,构成一个插入目的片段的新的质粒分子。 遗传转化:最简单的花序浸染,常用的农杆菌转化、基因枪轰击,还有花粉管通道等。
载体构建目的 ①用它作为运载工具,将目的基因转移到宿主细胞中去。②利用他在宿主细胞内对目的基因进行大量的复制(称为克隆)。理想的运载体是质粒(plasmid),在基因工程中,常用人工构建的质粒作为载体。
在一个典型的转基因植物生产过程中,这些步骤分别称为目的基因克隆、载体构建、转化、重组,以及筛选。基因克隆必须得有这个需要被转的基因。现在最广泛使用的BT蛋白基因和抗草甘膦基因,就来自于两种细菌。
第一节 植物基因工程载体种类 根据其功能和构建过程,可分为以下种类。 (1)目的基因克隆载体:其功能是保存和克隆目的基因。与 微生物基因工程相似,通常是由多拷贝的E. Coli小质粒为载 体。
4、过表达载体构建方法
首先要用一定的限制酶切割质粒,使质粒出现一个缺口,露出黏性末端。用同一种限制酶切断目的基因,使其产生相同的黏性末端。
当拿到一个基因的DNA片段后,就需要把它导入一个载体,一方面长期保存。另一方面也需要以载体为媒介将基因导入受体细胞中。基因表达载体的构建是基因工程的核心。常用的载体有细菌质粒,噬菌体和动植物病毒。其中质粒载体最常用。
图 过表达载体构建示意图目前已从动物、植物、病毒及微生物中分离到许多适用于植物的启动子。
基因过表达的基本原理是通过人工构建的方式在目的基因上游加入调控元件,使基因可以在人为控制的条件下实现大量转录和翻译,从而实现基因产物的过表达。 基因过表达的步骤是: 1,构建克隆。
5、植物表达载体构建的全过程?
构建基因表达载体的步骤不论动植物都是一样的。首先需要用工具酶剪切运载体上的DNA分子,然后用DNA连接酶将目的基因与被被切割的DNA分子连接。在这里的运载体有一定的要求,倘若不清楚可以追问。
载体构建:将目的基因通过酶连接到一个特定质粒分子上,构成一个插入目的片段的新的质粒分子。 遗传转化:最简单的花序浸染,常用的农杆菌转化、基因枪轰击,还有花粉管通道等。
载体构建目的 ①用它作为运载工具,将目的基因转移到宿主细胞中去。②利用他在宿主细胞内对目的基因进行大量的复制(称为克隆)。理想的运载体是质粒(plasmid),在基因工程中,常用人工构建的质粒作为载体。
在一个典型的转基因植物生产过程中,这些步骤分别称为目的基因克隆、载体构建、转化、重组,以及筛选。基因克隆必须得有这个需要被转的基因。现在最广泛使用的BT蛋白基因和抗草甘膦基因,就来自于两种细菌。
第一节 植物基因工程载体种类 根据其功能和构建过程,可分为以下种类。 (1)目的基因克隆载体:其功能是保存和克隆目的基因。与 微生物基因工程相似,通常是由多拷贝的E. Coli小质粒为载 体。
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