本篇文章给大家谈谈载体构建为何要有中间载体，以及为什么要构载体对应的知识点，希望对各位有所帮助，不要忘了收藏本站喔。 今天给各位分享载体构建为何要有中间载体的知识，其中也会对为什么要构载体进行解释，如果能碰巧解决你现在面临的问题，别忘了关注本站，现在开始吧！

1. 为什么非要先克隆到中间载体上测序,而不是直接到
2. 植物基因的工程有哪些载体?
3. 为什么非要先克隆到中间载体上测序,而不是直接到
4. 重组质菇一个DNA为什么要接入两个不同的载体

1、为什么非要先克隆到中间载体上测序,而不是直接到

首先看你是做什么用了，做什么用很关键的，你如果想表达蛋白，那么重新克隆吧 或者用点突变试剂盒，不过这个太贵。建议你克隆基因的时候选用高保真的酶，这样突变概率比较小。也不会比普通酶贵很多。

所以说DNA测序克隆到载体上是为了解决大片断DNA难以直接测定的问题，毕竟一次测定的DNA序列长度是有限的。就这些，呵呵。

另外，如果要做后续表达，也必须考虑到引物合成中不可避免的偶发错误，克隆到载体再测序可以清楚的检测。再者，还有比如引入酶切位点，正反向连接等特定实验要求的考虑。

对应于你的目标分子。TA克隆的好处在于选择灵活，万一一个位点不好使，同一批质粒还可以用其他酶再切。随时可以扩增。还有方便下游作业，比如说你要连接两端PCR产物，先克隆会比较方便一些。

此外，很多时候由于PCR产物不专一，直接测序效果不好，而克隆测序没这个问题，测序效果好于PCR产物测序。不过，如果你使用普通taq酶，PCR过程中会引入错误，用产物直接测序会掩盖这些错误，但克隆测序时则会保留这些错误。

2、植物基因的工程有哪些载体?

目的基因克隆载体：其功能是保存和克隆目的基因。与 微生物基因工程相似，通常是由多拷贝的E. Coli小质粒为载 体。 （2）中间克隆载体：是构建中间表达载体的基础质粒。

常用的载体有质粒和病毒。当然载体还有其它作用，如促进目的基因转化、表达等。 质粒是最常用的载体，它通常是DNA环状分子，可以独立地存在于细菌细胞中。

这种工程的常见载体是质粒。在基因工程中三种常用的载体是质粒、λ噬菌体的衍生物和动植物病毒，最常用的是质粒。在基因操作过程中使用运载体有两个用途：一是用它作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞中去。

最常用是质粒，其次是病毒等。载体有复制原点、标记基因、启动子、终止子、目的基因五部分。

科学家在培养转基因植物时，常用细菌中的质粒作为载体。解析：细菌属于原核生物，原核生物的细胞质中含有质粒（本质是小型双链环状DNA）。

3、为什么非要先克隆到中间载体上测序,而不是直接到

首先看你是做什么用了，做什么用很关键的，你如果想表达蛋白，那么重新克隆吧 或者用点突变试剂盒，不过这个太贵。建议你克隆基因的时候选用高保真的酶，这样突变概率比较小。也不会比普通酶贵很多。

所以说DNA测序克隆到载体上是为了解决大片断DNA难以直接测定的问题，毕竟一次测定的DNA序列长度是有限的。就这些，呵呵。

另外，如果要做后续表达，也必须考虑到引物合成中不可避免的偶发错误，克隆到载体再测序可以清楚的检测。再者，还有比如引入酶切位点，正反向连接等特定实验要求的考虑。

对应于你的目标分子。TA克隆的好处在于选择灵活，万一一个位点不好使，同一批质粒还可以用其他酶再切。随时可以扩增。还有方便下游作业，比如说你要连接两端PCR产物，先克隆会比较方便一些。

此外，很多时候由于PCR产物不专一，直接测序效果不好，而克隆测序没这个问题，测序效果好于PCR产物测序。不过，如果你使用普通taq酶，PCR过程中会引入错误，用产物直接测序会掩盖这些错误，但克隆测序时则会保留这些错误。

4、重组质菇一个DNA为什么要接入两个不同的载体

首先，扩增出DNA片段，连接到中间载体上（比如说pEASY），然后转化到大肠杆菌中。此步骤在大肠杆菌中能够高保真性复制，提高碱基的保真性，另外也起到增加目的片段的浓度的目的。提到的质粒也方便测序（因为中间载体片段较小）。

载体大小：大的质粒（大于15kb）不会很好转化而且DNA产量通常很低。在设计实验时要考虑到加入插入片段的最终载体大小，尽量用更小的载体。

这个是为了避免外源DNA和外源菌的污染而设计的两个对照。受体菌对照是为了避免外源DNA污染，而质粒对照则是为了避免外源菌污染。这个是为了实验科学严谨性而设计的。当然在实际应用中大部分转化实验均不需要做对照。

在重组段中加入抗性标记，之后培养出的菌体如果产生了相应的抗性，说明你的外源基因成功的导入了，这样才能继续下面的工作。

切割后能产生相同的黏性末端，末端彼此间可以发生碱基互补配对，从而形成重组DNA分子。所以当用两种不同限制酶也就是双酶切，分别切割含目的基因的DNA片段和质粒，能够防止发生目的基因与质粒自身连接体，充分克服单酶切的缺点。

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