大家好，今天小编关注到一个比较有意思的话题，就是关于构建载体测序发现点突变的问题，于是小编就整理了5个相关介绍构建载体测序发现点突变的解答，让我们一起看看吧。

1. 构建载体然后测序发现点突变有没有影响
2. 测序结果在引物下一个碱基发生突变是引物问题吗
3. shrna构建载体后测序突变了一个碱基还能用吗
4. 目的基因测序有一个位点发生突变,该怎么处理。我得突变位点离终止密码...
5. 用测序的方法检测点突变可靠吗?

1、构建载体然后测序发现点突变有没有影响

首先看你是做什么用了，做什么用很关键的，你如果想表达蛋白，那么重新克隆吧 或者用点突变试剂盒，不过这个太贵。 建议你克隆基因的时候选用高保真的酶，这样突变概率比较校也不会比普通酶贵很多。

我想，问题可能出现在以下几个环节：PCR是否成功？如果跑胶后目的片段的条带位置正确，可基本确定成功。

我怀疑你这个克隆是由于在载体构建过程中出现的突变，所以你可以再送其他阳性克隆去测序，直到拿到没有突变的正确质粒。

没有。1300空载体没有突变影响表达，不转基因应该是空白对照，就是什么也不做的正常表达，转空载是为了看这个实验流程本身对基因表达有没有什么影响，类似于假手术组。

有影响。载体构建是是构建含外源DNA的质粒，载体构建是分？物学研究常？的？段之？，载体构建测序后重新转化会使得质粒污染，准确率降低，所以载体构建测序后重新转化有影响。

2、测序结果在引物下一个碱基发生突变是引物问题吗

有可能是在PCR扩增目的片段时，由于未采用高保真DNA聚合酶，导致的碱基突变。也可能是PCR扩增目的片段时，设计的引物特异性不高，或反应体系及参数对特异性控制的不好，获得的是非目的条带。

测序反应开始及最后都不是很稳定，表现在测序结果上就是如此了。SNP在测序结果上的表现是该位点处为双峰。因为其他地方序列都是一样的，末端终止得到的片段也就是完全一样的，只有在SNP位点处才会得到两种片段。

首先看你是做什么用了，做什么用很关键的，你如果想表达蛋白，那么重新克隆吧 或者用点突变试剂盒，不过这个太贵。建议你克隆基因的时候选用高保真的酶，这样突变概率比较小。也不会比普通酶贵很多。

我想，问题可能出现在以下几个环节：PCR是否成功？如果跑胶后目的片段的条带位置正确，可基本确定成功。

3、shrna构建载体后测序突变了一个碱基还能用吗

通常酶量不能超过体系1/10，否则甘油会妨碍酶切的进行。

测序发现引物区域有突变，特别是40个碱基以下的引物， 发生的概率不大，但是肯定也会发生。用户一般可以放心，引物序列一般都是通过电脑直接将您的序列COPY到合成仪的，碱基输错的机会不多。

第一个问题，只有一个碱基缺失，克隆测序和引物合成都没有问题；第二个问题：酶切连接入载体后，克隆过程就完成了；第三个问题：如果你说的是转化过程的话，应该是先做好连接，再做转化。

我用TAKARA的PRIMESTAR扩增的一段序列，3400BP长，建好克隆后测序。结果发现中间插入了一个C碱基。本来模板是CCCCC，测序结果呈现CCCCCC。在图片的鼠标指示处。

那么没必要重新扩增了。如果必须要得到理想中的序列，那就需要做突变修复。测序一般每个反应开始都不准确，首先排除这个因素。同意楼上的同时送几个测序进行比较，用高保真的酶再做一次，修复突变比较麻烦。

4、目的基因测序有一个位点发生突变,该怎么处理。我得突变位点离终止密码...

突变为另一种起始密码子，则基因仍然可以继续转录翻译，没有影响，但是蛋白质的第一个氨基酸会发生改变，可能会影响蛋白质的二级和三级结构。

也就是一个相对基因本身不完整的肽链。一条肽链只有一个起始密码子和一个终止密码子，起始密码子后面再出现AUG那就当中间的甲硫氨酸了，碰到第一个终止密码子肽链合成就结束了，后面尾巴还有的终止密码子也就没用了。

其基本原理为单链DNA在中性条件下会形成二级结构，这种二级结构依赖于其碱基组成，即使一个碱基的不同，也会形成不同的二级结构而出刺同的迁移率。由于该法简单快速，因而被广泛用于未知基因突变的检测。

通常 移码突变得到新的密码子产生一个较短的蛋白质或造成对正常终止密码子的通读，得到比正常蛋白质更长的蛋白质，二种情况都是无功能的蛋白质。）。

5、用测序的方法检测点突变可靠吗?

测序法的基本原理是双脱氧终止法，是进行基因突变检测的可靠方法，也是使用最多的方法。但其过程繁琐、耗时长，灵敏度不高，对环境和操作者有危害，故在临床应用中存在一定的限制。

应该说，使用组织标本查找体细胞突变的可信度并不是很高。

测序法的基本原理是双脱氧终止法，是进行基因突变检测的可靠方法，也是使用最多的方法。但其过程繁琐、耗时长，灵敏度不高，对环境和操作者有危害，故在临床应用中存在一定的限制。

应用二代测序技术：二代测序技术可以同时检测多个突变点，而且准确度更高，可以避免漏检或误检的情况。

到此，以上就是小编对于构建载体测序发现点突变的问题就介绍到这了，希望介绍关于构建载体测序发现点突变的5点解答对大家有用。