构建酿酒酵母载体(构建酿酒酵母载体的意义)
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1、酿酒酵母 载体构建 用的载体是PDR196 载体构建时还用加目的基因的终止密...
这要考虑你连目的基因到pDR196上是干嘛用的了,一般来讲,需要在酵母内表达完整的功能蛋白就需要加目的基因的终止密码子了,完整的ORF包括从起始密码子开始结束于终止密码子。
例如,载体需要复制,那必须有复制起点,若是表达载体,还需要有启动子,终止子,上游调控原件等顺式作用元件。
酿酒酵母疫苗是一种新型的基因工程疫苗,以酿酒酵母菌作为抗原表达载体构建的重组全酵母疫苗。既能携带特异性目的抗原,又能挥发出免疫佐剂作用,能有效地诱导出抗原特异性的免疫应
每个基因都带有启动子和终止子。提取的目的基因本身就带有启动子和终止子,如果是通过逆转录方法合成的目的基因,就要先人工加上启动子和终止子,再进行扩增。
把引物设计在启动子和终止子之间不就可以了。
2、人工染色体的常用载体
人工染色体载体实际上是一种“穿梭”载体,含有质粒载体所必备的第一受体(大肠杆菌)内源质粒复制起始位点(ori),还含有第二受体(如酵母菌)染色体DNA着丝点、端粒和复制起始位点的序列,以及合适的选择标记基因。
质粒、噬菌体、病毒载体。质粒:质粒是环状双链DNA分子,常见于细菌细胞内,也可通过人工方法导入其他生物体内。噬菌体:噬菌体是一种侵袭细菌的病毒,有高效表达和克隆扩增外源基因的能力。
酵母人工染色体(YAC)是人工染色体中能克隆最大DNA片段的载体,可以插入100-2000kb的外源DNA片段。YAC是有酵母的自主复制序列、着丝点、四膜虫的端粒以及酵母选择性标记组成的酵母线性克隆载体。
常用载体有质粒(一般克隆10bp左右的DNA片段)、噬菌体(与质粒相比,噬菌体可以克隆较大的DNA片段,噬菌体M13可以使DNA以单链 形式 被提取出来)、黏粒(可以克隆45bp左右的DNA片段)。
在 YAC载体中最常用的是 pYAC4 。由于酵母的染色体是线状的,因此其在工作状态也是线状的。但是,为了方便制备YAC载体, YAC 载体以环状的方式存在,并增加了普通大肠杆菌质粒载体的复制元件和选择标记,以便保存和增殖。
3、如何在酿酒酵母中构建木糖代谢工程菌
选择一种合适的酿酒酵母作为目标菌株。确定目标菌株中木糖代谢的代谢途径。引入外源基因来增强木糖代谢能力。将所需的外源基因插入到适当的表达载体中,以确保基因在目标菌株中得到表达。
将淀粉酶基因切割下来所用的工具是___,用___将淀粉酶基因与载体拼接成新的DNA分子,下一步将该DNA分子___,以完成工程菌的构建。
其繁殖的方法为出芽生殖。小知识:酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)细胞大小:5~10×5 ~21um。酵母菌一般呈球形、卵圆形、椭圆形,有的呈圆柱状、柠檬形、三角形等。
酒用酵母是指含有大量能将糖类转化为酒精的酵母等人工培养液,它与酵母的概念有所区别,酵母是指个体的微生物酵母菌。用于酿造酒用的酵母。多为酿酒酵母(Sac-charomyces cerevisiae)的不同品种。
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