构建克隆载体质粒的要求(构建克隆载体质粒的要求有哪些)
大家好,今天小编关注到一个比较有意思的话题,就是关于构建克隆载体质粒的要求的问题,于是小编就整理了5个相关介绍构建克隆载体质粒的要求的解答,让我们一起看看吧。
1、基因工程中常用哪两类克隆载体?举例说明理想质粒载体应具备什么条件...
Vector):通常采用从病毒、质粒或高等生物细胞中获取的DNA作为克隆载体,在载体上插入合适大小的外源DNA片段,并注意不能破坏载体的自我复制性质。将重组后的载体引入到宿主细胞中,并在宿主细胞中大量繁殖。
对受体细胞无害 5大小合适,便于操作 天然质粒并不完全具备上述条件,所以都要进行人工改造。
就可以作为筛选的标记基因。一般来说,天然运载体往往不能满足上述要求,因此需要根据不同的目的和需要,对运载体进行人工改建。当前所使用的质粒载体几乎都是经过改建的。载体DNA分子大小应合适,以便操作。
用人工方法取得目的基因的适宜载体,即质粒(一种环状双链DNA)或病毒。
基因工程的载体有质粒、动植物病毒和噬菌体。其必须具备的条件有:包含有复制原点,启动子和终止子,限制性核酸内切酶位点和标记基因,另外在受体细胞中能稳定存在,不被分解。
2、克隆载体的必要条件是哪些?
条件:①能在宿主细胞中复制繁殖,而且最好要有较高的自主复制能力。②容易进入宿主细胞,而且进入效率越高越好。③容易插入外来核酸片段,插入后不影响其进入宿主细胞和在细胞中的复制。
作为基因克隆载体一般应该具备以下条件:(1)在克隆载体合适的位置必须含有允许外源DNA片段插入的克隆位点,并且这样的克隆位点应尽可能的多。作为克隆位点的限制性内切核酸酶的识别序列一般在克隆载体上只有一个。
载体是指能传递能量或运载其他物质的物体。条件:能在受主细胞内稳定存在,不会对宿主细胞造成危害,能自我复制。具有标记基因。含有1至多个限制酶的识别序列及切点。含有启动子,终止子。
不包括A,所有的载体都需具备三个条件:一个复制子、一个选择性标志和一个克隆位点。
3、作为载体的质粒需要具有哪些基本结构
用作克隆载体的理想质粒一般具备下述特点: ①具有松驰型复制子(如ColE1),复制子(replicon)是质粒自我增殖所必不可少的基本条件,并可协助维持使每个细胞含有一定数量的质粒拷贝。
质粒的三种构型内容如下:原核细胞中染色体外的共价闭合的环状DNA分子。能够独立于细胞的染色体而进行复制,并依赖于宿主细胞。其所带的遗传信息能赋予宿主细胞特定的遗传性状。在宿主菌中具有不相容性。
复制子:又称复制起始区,包含控制质粒DNA复制起点和质粒拷贝数等遗传因素。选择标记:由质粒编码的选择标记赋予宿主细胞新的表型,用于鉴定和筛选转化有质粒的宿主细胞。
但一般天然质粒都还含有某种特殊的基因,如抗性、某物质降解酶什么的,赋予质粒一定功能。
4、分子克隆的载体应具备哪些条件
条件:①能在宿主细胞中复制繁殖,而且最好要有较高的自主复制能力。②容易进入宿主细胞,而且进入效率越高越好。③容易插入外来核酸片段,插入后不影响其进入宿主细胞和在细胞中的复制。
条件:能在受主细胞内稳定存在,不会对宿主细胞造成危害,能自我复制。具有标记基因。含有1至多个限制酶的识别序列及切点。含有启动子,终止子。
作为载体必须具备两条件:一是该载体在细胞内必须能自主复制,即必须具备复制原点;二是该载体必须具备适合的酶切位点,且这些酶切位点不在复制原点区域内。以上两条,保证了载体的可繁殖性和可利用性。
克隆载体:能在宿主细胞中复制繁殖,而且最好要有较高的自主复制能力;容易进入宿主细胞,而且进入效率越高越好;容易从宿主细胞中分离纯化出来, 这才便于重组操作。
载体具备的条件:①能在受体细胞中复制并稳定保存。②具有一至多个限制酶切点,供外源DN段插入。③具有标记基因,供重组DNA的鉴定和选择。
5、1质粒作为基因工程的载体应具备那些条件?
② 有适宜的限制酶切位点。最好是对多种限制酶有单一切点,且酶切位点不在复制原点内 ③具备对重组体易于检测的选择性遗传标记。除上述的基本条件外,根据实验的需要,人们还常希望载体具有其他的各种特征。
质粒作为载体的条件有:具有复制起始点。具有两种以上易被检测的选择性标记。在选择标记上具有多种限制酶的单一切点。具有尽可能小的相对分子质量。应属于松弛复制型。
在宿主细胞中能保存下来并大量复制。具有一个至多个酶切位点。具有标记基因。对受体细胞无毒害作用。
质粒作为载体必须具备的条件:多个酶切位点、对受体细胞没有危害并易于分离、能自我复制并稳定保存、具有特殊的标记基因,质粒广泛存在于生物界,从细菌、放线菌、丝状真菌、大型真菌、酵母到植物,甚至人类机体中都含有。
一般来说,天然运载体往往不能满足上述要求,因此需要根据不同的目的和需要,对运载体进行人工改建。现在所使用的质粒载体几乎都是经过改建的。
到此,以上就是小编对于构建克隆载体质粒的要求的问题就介绍到这了,希望介绍关于构建克隆载体质粒的要求的5点解答对大家有用。
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