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酵母表达载体构建过程图解(酵母表达载体的构建)

酵母表达载体构建过程图解(酵母表达载体的构建)

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  1. 酵母人工染色体的YAC 载体的工作原理
  2. 重组质粒转入酵母菌内以什么形式存在
  3. 酵母双杂交技术原理和步骤

1、酵母人工染色体的YAC 载体的工作原理

人工染色体载体(artificial chromosome vector):利用染色体的复制元件来驱动外源DNA片段复制的载体。

随后与两端具emphasis:role=italicEcoemphasisRI酶切末端的外源DNA连接,构成酵母人工染色体。用电激仪把此人工染色体转化人酵母受体细胞。

人工染色体是人工构建的一类能携带大片段DNA的克隆载体。酵母人工染色体(YAC)是一类目前能携带最大外源DNA片段的人工构建载体。含有着丝粒、端粒、酵母自主复制序列3个酵母染色体必要元件,还含有限制性内切酶位点和选择标记基因。

YAC克隆不容易与酵母自身染色体相分离。应用领域在染色体区带构建YAC重叠群,可以促进大规模基因组测序和致病基因的克隆。 细菌人工染色体(BAC)是以细菌F因子为基础构建的细菌克隆载体。

【答案】:YAC需要染色体中心所有功能性元件,包括着丝粒、DNA复制区,以及2个端粒。YACS可以插入300kb大小的外源DNA片段,比质粒或粘粒多得多。

2、重组质粒转入酵母菌内以什么形式存在

在大肠杆菌等细菌中以质粒形式存在,分为严谨型和松弛型两种,严谨型质粒随细胞染色体复制而复制,松弛型质粒在染色体复制停止后可以继续进行自我复制。

酒精) 2CO(二氧化碳) ATP(能量)基因克隆实验中常用的真核生物受体细胞,培养酵母菌和培养大肠杆菌一样方便。酵母克隆载体的种类也很多。酵母菌也有质粒存在,这种2μm 长的质粒称为2μm 质粒,约6 300bp。

以及来自酵母的emphasis:role=italicURAemphasis3基因,它既可以作为酵母细胞的选择标记,也可与酵母染色体DNA进行同源重组。这种质粒可在大肠杆菌中复制,但不能在酵母细胞中进行自主复制。

酵母菌的质粒存主要存在于细胞核之中。质粒实际也是细菌、酵母菌和放线菌等生物中染色体(或者拟核)以外的DNA分子,存在细胞核内具备了自主复制能量。

酵母菌也有质粒存在,这种2μm 长的质粒称为2μm 质粒,约6 300bp。这种质粒至少有一段时间存在于细胞核内染色体以外,利用2μm 质粒和大肠杆菌中的质粒可以构建成能穿梭于细菌与酵母菌细胞之间的穿梭质粒。

3、酵母双杂交技术原理和步骤

具体实验步骤如下:构建酵母表达载体:将含有自身复制元件2μ、酵母转录起始序列、选择性筛选的标记基因等元件的酵母表达载体与感兴趣的蛋白质基因融合,在表达载体中得到融合基因。

酵母双杂交的操作步骤如下:构建酵母双杂交载体 首先需要构建酵母双杂交载体,该载体包含两个重要的部分:一个携带蛋白质结构域的DNA结合域和一个携带转录激活域的DNA结合域。

酵母双杂交系统由Fields和Song等首先在研究真核基因转录调控中建立。

酵母双杂交技术是一种在分子生物学研究中常用的技术,主要用于研究蛋白质之间的相互作用。

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