本篇文章给大家谈谈双荧光载体的构建，以及双荧光素酶报告基因载体构建对应的知识点，希望对各位有所帮助，不要忘了收藏本站喔。 今天给各位分享双荧光载体的构建的知识，其中也会对双荧光素酶报告基因载体构建进行解释，如果能碰巧解决你现在面临的问题，别忘了关注本站，现在开始吧！

1. 双荧光素酶报告基因实验原理?
2. 双荧光素酶应用实例(一)
3. 双荧光素酶实验原理是什么?

1、双荧光素酶报告基因实验原理?

双荧光素酶实验原理：利用荧光素酶与底物结合发生化学发光反应的特点，把感兴趣的基因转录的调控元件克隆在萤火虫荧光素酶基因（firefly luciferase）的上游，构建成荧光素酶报告质粒。

以下是双荧光素酶报告基因实验的基本原理步骤：构建负责表达荧光素酶的载体：在实验中，通常将感兴趣的基因调控区域与荧光素酶基因关联起来，构建成双荧光素酶报告基因的表达载体。

利用荧光素酶与底物结合发生化学发光反应的特性，把感兴趣的基因转录的调控元件克隆在萤火虫荧光素酶基因（firefly luciferase）的上游，构建成荧光素酶报告质粒。然后转染细胞，适当刺激或处理后裂解细胞，测定荧光素酶活性。

实验简介 Luciferase报告基因系统是以 荧光素（luciferin） 为底物来检测 萤火虫荧光素酶 （fireflyluciferase）活性的实验。荧光素底物会在荧光素酶作用下会发光（波长540-600nm），且光强能反应荧光素酶的表达量。

miRNA主要通过作用于靶基因的3’ UTR起作用，因此可以将目的基因的3’ UTR区域构建到载体报告基因萤火虫荧光素酶的后面，通过与miRNA共转染后，检测报告基因表达的变化来反映miRNA对目的基因的抑制作用。

2、双荧光素酶应用实例(一)

例子4 例子5---启动子结构分析。将启动子区域（约2k左右）进行分段截短或突变，构建入报告基因载体，检测荧光素酶活性。

细胞处理： 双荧光素酶检测试剂盒依照protocol操作；荧光检测： 使用酶标仪或具有类似检测功能的设备进行荧光强度检测 数据分析 实验案例：CDK9是miR-206的靶标（a），但是CDK9突变型不是miR-206的靶标（b）。

利用双荧光素酶系统，在水稻原生质体内证实OsJAZ9可以降低OsMYB30的转录激活活性并且增强OsMYB30对于BMY2/6/10基因启动子的抑制作用从培养基上切取培养8-10d的水稻幼苗，去除幼苗外层包裹的叶子。

以Promega公司双荧光素酶检测试剂盒为例： 试剂准备 按照说明书配制PLB细胞裂解液、LAR II检测液、StopGlo检测液。

双荧光素酶通常是指萤火虫荧光素酶和海肾荧光素。其中荧火虫荧光素是从甲虫（Photinus pyralis）中分离得到，分子量为61kDa；而海肾（Renilla）荧光素酶则是从海肾（Renilla reniformis）中分离，分子量为36kDa。

3、双荧光素酶实验原理是什么?

双荧光素酶报告基因实验原理是利用双荧光素酶作为荧光素酶的标记来研究基因表达与调控的机制。

以下是双荧光素酶报告基因实验的基本原理步骤：构建负责表达荧光素酶的载体：在实验中，通常将感兴趣的基因调控区域与荧光素酶基因关联起来，构建成双荧光素酶报告基因的表达载体。

双荧光素酶实验都用293细胞是转染效率较高。双荧光素酶检测的原理是通常选择转染效率较高的293T细胞或原代细胞等，将这两个质粒共同转染进入293细胞中来检测荧光时，pRL-TK这个质粒起到一个内参的作用。

双荧光素酶实验验证启动子活性需要几个质粒：双荧光素酶实验验证启动子活性需要3个质粒。

到此，以上就是小编对于双荧光载体的构建的问题就介绍到这了，希望介绍关于双荧光载体的构建的3点解答对大家有用。