噬菌粒载体的构建方法是,噬菌粒载体的构建方法是什么意思
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1、M13噬菌体载体与噬菌质粒有何不同?
概念不同 质粒是细菌、酵母菌和放线菌等生物中染色体(或拟核)以外的DNA分子。载体:某些能传递能量或运载其他物质的物质。
克隆的片段大:M13噬菌体的DNA在包装时不受体积的限制,所以容载能力大。有报道,有些噬菌体颗粒可以包装比野生型丝状噬菌体DNA长6~7倍的DNA(插入片段可达40kb)。
M13噬菌体是一种独特的载体系统,它只能侵袭具有F基因的大肠杆菌,但不裂解寄主菌。M13DNA(RF)在寄主菌内是双链环状分子,象质粒一样自主复制,制备方法同质粒。
增殖不同 λ噬菌体是一种温和噬菌体,它通过尾管将基因组DNA注入大肠杆菌,其蛋白质外壳留在菌外。进人细菌后的DNA以两端12bp互补单链黏性末端连成双链环状,能以两种不同的方式增殖。
pUC118和pUC119是功能比较完善的噬菌粒载体,对外源DNA片段的大小不敏感,并且保留了pUC质粒在克隆操作方面的优点,噬菌体质粒在寄主细胞内以质粒形式存在,复制产生双链DNA。
2、什么是噬菌粒?
组成不同。表达载体:表达载体四部分:目的基因、启动子、终止子、标记基因。载体:常见的载体有质粒、噬菌粒、酵母人工染色体。
是一种质粒载体。下图是它的结构。常用载体有:质粒载体,噬菌体载体,M13噬菌体载体,柯斯质粒载体,噬菌粒载体。
虽然噬菌粒载体携带有M13的IG区,能够合成单链DNA,但是它没有M13的功能基因,没有M13基因2的产物存在,所以不能合成单链DNA。
如噬菌粒载体具有噬菌体的高效性和质粒载体系统可以利用蓝白斑筛选的便利;④cDNA的分子克隆:cDNA连入载体,转化重组体,扩增;⑤对构建的cDNA文库进行鉴定,测定文库包含的克隆数,评价文库质量。
3、噬菌粒载体是由噬菌体和质粒载体重组而成的么
噬菌质粒是噬菌体M13的基因间隔区(内含有M13的复制起点)插入到细菌质粒载体中构建而成的质粒。噬菌粒在大肠杆菌细胞内以质粒的复制起点进行复制,产生双链DNA。
在构建基因文库时,不同的重组噬菌体DNA经过裂解生长过程最终形成大量的噬菌斑,这些噬菌斑的集合,就构成了基因文库,用λ噬菌体载体构建基因文库时,文库是以噬菌斑的形式存在的,而质粒载体构建的文库是以菌落的形式存在的。
噬菌粒(phagemid)实际上是带有丝状噬菌体大间隔区的质粒载体,是集质粒和丝状噬菌体的有利特征于一身的载体,具有ColEI复制起点及抗生素抗性选择标记的质粒,以及丝状体噬菌体的间隔区。
质粒和噬菌体载体只能在细菌中繁殖,不能满足真核DNA重组需要。感染动物的病毒可改造用作动物细胞的载体。由于动物细胞的培养和操作较复杂、花费也较多,因而病毒载体构建时一般都把细菌质粒复制起始序列放置其中。
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