大家好，今天小编关注到一个比较有意思的话题，就是关于构建载体如何加his标签的问题，于是小编就整理了3个相关介绍构建载体如何加his标签的解答，让我们一起看看吧。

1. his标签怎么设计引物
2. 组氨酸标签怎么加
3. 怎么给一个目的基因加his 标签

1、his标签怎么设计引物

很简单，根据需要，直接把HIS序列添加到正向或者反向引物的5’端，PCR扩增后目的条带就带有HIS标签了。

因为N端的tag是必须带在你蛋白N端的（如果用pET32a的话）。当然N端的tag带上没坏处，就是需要买EK酶（有点贵）。还需要在纯化后再过一次柱子。如果你不用后面的His标签，你需要在你的目的基因上加上终止密码子。

引物5’端序列对PCR影响不太大，因此常用来引进修饰位点或标记物。验证引物的特异性：在“Primer Pair Specificity Checking Parameters”区，选择设计引物或验证引物时的目标数据库和物种。这一步是比较重要的。

引物设计的实质：一小段单链DNA或RNA，在核酸合成反应时，作为每个多核苷酸链进行延伸的出发点而起作用的多核苷酸链。

2、组氨酸标签怎么加

his标签蛋白就是：六个组氨酸。一般存在于重组蛋白氮端或碳端，便于纯化该重组蛋白，组氨酸可以特异性的结合镍离子，带有组氨酸标签的重组蛋白可以被镍柱吸附，从而达到纯化的目的。

可以。用户是在羧基端加组氨酸标签，而下游引物也是按照5-3的顺序去设计的，需要加上反向互补的组氨酸标签在下游引物的5端，所以，使用组氨酸标签可以设计在引物上。组氨酸是一种α-氨基酸，分子量为155。

His-Tag（组氨酸标签）His-Tag（组氨酸标签）His-Tag 由6-10 个组氨酸残基组成，分子量不到0.84KD，通常插入在目的蛋白的C 末端或N 末端。

组氨酸标签。可与多种金属离子发生特殊的相互作用，包括Ca2 、Mg2 、Ni2 、Co2 等，其中以镍离子使用最为广泛。在重组蛋白末端融合多个组氨酸成串的肽段（常用6个组氨酸）。

3、怎么给一个目的基因加his 标签

组氨酸标签。可与多种金属离子发生特殊的相互作用，包括Ca2 、Mg2 、Ni2 、Co2 等，其中以镍离子使用最为广泛。在重组蛋白末端融合多个组氨酸成串的肽段（常用6个组氨酸）。

his标签蛋白就是：六个组氨酸。一般存在于重组蛋白氮端或碳端，便于纯化该重组蛋白，组氨酸可以特异性的结合镍离子，带有组氨酸标签的重组蛋白可以被镍柱吸附，从而达到纯化的目的。

His-Tag（组氨酸标签）His-Tag 由6-10 个组氨酸残基组成，分子量不到0.84KD，通常插入在目的蛋白的C 末端或N 末端。His-Tag是目前原核表达最常用的标签，蛋白纯化完之后可以不需切除此标签，也不会对蛋白产生功能影响。

当然N端的tag带上没坏处，就是需要买EK酶（有点贵）。还需要在纯化后再过一次柱子。如果你不用后面的His标签，你需要在你的目的基因上加上终止密码子。

蛋白质基因融合技术中，常见的标签有 His6，六个组氨酸残基组成的融合标签，可插入在目的蛋白的C末端或N末端。当某一个标签的使用，一是能构成表位利于纯化和检测；二是构成独特的结构特征利于纯化。

到此，以上就是小编对于构建载体如何加his标签的问题就介绍到这了，希望介绍关于构建载体如何加his标签的3点解答对大家有用。