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1. 介绍一下酵母单双杂交 最好附上图
2. 酵母双杂交技术原理和步骤
3. 酵母双杂交(探究蛋白质相互作用的新方法)
4. 酵母人工染色体的YAC 载体的工作原理
5. 酵母双杂交诱饵载体的构建方法?

1、介绍一下酵母单双杂交 最好附上图

酵母双杂交系统的最主要的应用是快速、直接分析已知蛋白之间的相互作用及分离新的与已知蛋白作用的配体及其编码基因。

酵母单杂交系统和双杂交系统是两种常用的蛋白质相互作用检测方法，它们的主要区别在于检测的原理和应用范围不同。酵母单杂交系统Y1H（Yeast One Hybrid System）用于发现DNA序列与转录因子结合的技术。

酵母单杂交（yeast one hybrid）是在酵母双杂交的基础上发展起来的技术，主要用于研究蛋白质和DNA元件之间的相互作用。

酵母双杂交的操作步骤如下：构建酵母双杂交载体 首先需要构建酵母双杂交载体，该载体包含两个重要的部分：一个携带蛋白质结构域的DNA结合域和一个携带转录激活域的DNA结合域。

2、酵母双杂交技术原理和步骤

具体实验步骤如下：构建酵母表达载体：将含有自身复制元件2μ、酵母转录起始序列、选择性筛选的标记基因等元件的酵母表达载体与感兴趣的蛋白质基因融合，在表达载体中得到融合基因。

酵母双杂交的操作步骤如下：构建酵母双杂交载体 首先需要构建酵母双杂交载体，该载体包含两个重要的部分：一个携带蛋白质结构域的DNA结合域和一个携带转录激活域的DNA结合域。

酵母双杂交系统由Fields和Song等首先在研究真核基因转录调控中建立。

酵母双杂交技术是一种在分子生物学研究中常用的技术，主要用于研究蛋白质之间的相互作用。

3、酵母双杂交(探究蛋白质相互作用的新方法)

构建酵母双杂交载体 首先需要构建酵母双杂交载体，该载体包含两个重要的部分：一个携带蛋白质结构域的DNA结合域和一个携带转录激活域的DNA结合域。

研究蛋白质之间的相互作用：酵母双杂交技术可以用于研究蛋白质之间的相互作用，这对于理解蛋白质的功能和生物学过程具有重要意义。

当两个蛋白质的结合能够激活报告基因的表达，则表明这两个蛋白质之间存在相互作用关系。

酵母双杂交系统是在真核模式生物酵母中进行的，研究活细胞内蛋白质相互作用，对蛋白质之间微弱的、瞬间的作用也能够通过报告基因的表达产物敏感地检测得到，它是一种具有很高灵敏度的研究蛋白质之间关系的技术。

4、酵母人工染色体的YAC 载体的工作原理

人工染色体载体（artificial chromosome vector）：利用染色体的复制元件来驱动外源DNA片段复制的载体。

随后与两端具emphasis：role=italicEcoemphasisRI酶切末端的外源DNA连接，构成酵母人工染色体。用电激仪把此人工染色体转化人酵母受体细胞。

人工染色体是人工构建的一类能携带大片段DNA的克隆载体。酵母人工染色体（YAC）是一类目前能携带最大外源DNA片段的人工构建载体。含有着丝粒、端粒、酵母自主复制序列3个酵母染色体必要元件，还含有限制性内切酶位点和选择标记基因。

YAC克隆不容易与酵母自身染色体相分离。应用领域在染色体区带构建YAC重叠群，可以促进大规模基因组测序和致病基因的克隆。 细菌人工染色体（BAC）是以细菌F因子为基础构建的细菌克隆载体。

【答案】：YAC需要染色体中心所有功能性元件，包括着丝粒、DNA复制区，以及2个端粒。YACS可以插入300kb大小的外源DNA片段，比质粒或粘粒多得多。

5、酵母双杂交诱饵载体的构建方法?

构建酵母双杂交载体 首先需要构建酵母双杂交载体，该载体包含两个重要的部分：一个携带蛋白质结构域的DNA结合域和一个携带转录激活域的DNA结合域。

可参考：诱饵基因转化筛库宿主菌Y190 1） 3 个1mm 克隆接种于3mlYPD 液体培养基30℃振荡培养20 小时（过夜），OD600 达到2 左右。

具体实验步骤如下：构建酵母表达载体：将含有自身复制元件2μ、酵母转录起始序列、选择性筛选的标记基因等元件的酵母表达载体与感兴趣的蛋白质基因融合，在表达载体中得到融合基因。

将待测基因与Gal4或LexA或其他合适蛋白的DNA结合域融合构建诱饵质粒；将诱饵质粒转化缺乏报告基因启动子的酵母细胞株中，选择被转化的酵母；再将文库质粒转化到酵母中；通过报告基因的功能筛选相互作用的蛋白。

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