本篇文章给大家谈谈载体构建酶切跑胶无条带，以及载体的酶切对应的知识点，希望对各位有所帮助，不要忘了收藏本站喔。 今天给各位分享载体构建酶切跑胶无条带的知识，其中也会对载体的酶切进行解释，如果能碰巧解决你现在面临的问题，别忘了关注本站，现在开始吧！

1. 慢切载体跑胶没有条带
2. 为什么基因与载体连接后直接泡胶但是什么条带都没有
3. 为什么酶切后没有条带
4. 载体酶切切不出条带是怎么回事?
5. 构建载体,双酶切质粒后,不是只有一条质粒带就是一条带都没有,寻是什 ...

1、慢切载体跑胶没有条带

我觉得不需要另外转入空载，PMD18-T vector的连接率挺高的。只要挑取阳性克隆抽质粒，经酶切、PCR后有目的条带就可以拿去测序了。

如果检测胶可以看到条带，回收胶看不到的话，可能是你PCR的产物的量太少了，回收胶胶孔宽，PCR结果不好的条带可能就看不到了。

一般是不要切胶，直接把第一次的pcr产物取一微升作为底物，再用第二队引物扩增一次，如果引物设计正确，就只会出现一条条带了。如果要计算大小，就按楼上说的。但是雀式pcr的目的就是至少做2次，以保证特异性。

建议用新胶，新tbc（tac）重新跑一次，样品用醋酸铵重新纯化，电泳槽用缓冲液冲洗多次再用。另外可以在电泳槽周围放冰，降低电泳温度，并适当调低电压，因为高温对核酸降解也有促进作用。

2、为什么基因与载体连接后直接泡胶但是什么条带都没有

“单酶切可以切开，而且质粒的大小明显小于空质粒”，首先你的表达有误，单酶切可以切开，说明目的基因有连接上，那么重组载体该是比空载大的。质粒稀释100倍后PCR，有目的条带，也说明了是阳性克隆。

如果检测胶可以看到条带，回收胶看不到的话，可能是你PCR的产物的量太少了，回收胶胶孔宽，PCR结果不好的条带可能就看不到了。

紧接着，又做了一次，所有的样品都有PCR产物了。

很显然你的质粒没有构建成功。感觉是连接出了问题，pBI121载体很大，回收比较困难，建议你测一下回收后的浓度。如果太低的话，建议加大酶切量。

所以整团DNA样品漂在上面。2）没有MARKER，请确定你的胶是否加了足够量的EB或是别的染色剂。另外请检查电泳开始后，电泳槽两侧是否有气泡冒出，如果没有，证明电泳仪坏了，没有通电，那么肯定不会出现条带。

3、为什么酶切后没有条带

建议可以用分光光度计测一下核酸浓度，看看是不是浓度太低。同时可以做一个阴性对照，就是不加酶，1ul质粒，20ul体系，看看最后有没有质粒条带。这样可以检测制胶、核酸浓度等的其他原因。

如果是有质粒条带而没有短片段条带，也就是说没切开了。可能酶切位点发生了突变，也可能是酶失活了。如果是空白...我也不知道怎么回事儿了...再重复一次吧。如果认为之前的步骤都没什么问题，不如直接送测序。

可能其中一个酶质粒上有2个酶切位点，或是因为酶切不彻底，部分质粒没有被双酶切（大片段，小片段，和单酶切得出的片段，因片段大小不一呈现出三条带）。

如果酶切前有DNA条带，而酶切后没有，很可能是激发了限制酶的星号活性，把DNA切碎了。

4、载体酶切切不出条带是怎么回事?

双酶切质粒或的一条带很正常的，因为多克隆区域切下来的那个小片段太少（总碱基mol量），电泳常常是看不到的，这是常见现象。一条带都没有 不正常。估计是电泳时间不够吧。

如果理论上：用用sacⅡ单酶后能出现你的目的条带，但实际上没有酶切出目的条带（t载体有），我认为原因是T载体自连，你的目的条带没有连上！建议重连，并用菌落PCR检验，然后用酶切检验。

凝胶浓度是不是太大了使marker（相当于阳性对照）的大条带都跑不开。建议可以用分光光度计测一下核酸浓度，看看是不是浓度太低。同时可以做一个阴性对照，就是不加酶，1ul质粒，20ul体系，看看最后有没有质粒条带。

⑤模 板核酸变性不彻底。在酶和引物质量好时，不出现扩增带，极有可能是标本的消化处 理，模板核酸提取过程出了毛病，因而要配制有效而稳定的消化处理液，其程序亦应 固定不宜随意更改。

5、构建载体,双酶切质粒后,不是只有一条质粒带就是一条带都没有,寻是什 ...

可能其中一个酶质粒上有2个酶切位点，或是因为酶切不彻底，部分质粒没有被双酶切（大片段，小片段，和单酶切得出的片段，因片段大小不一呈现出三条带）。

补充一点就是看看你的片段是否有这个酶的酶切位点。尽管有些好笑，但是有人确实犯过这样的错误。你提取的质粒浓度很低的话，在酶切的时候就少加点水多加点质粒。不然浓度低当然看不见。

如果是单酶切，超螺旋质粒会变成开链DNA，开链的DNA在凝胶中泳动速度慢于超螺旋质粒，因此条带会偏大，这是酶切充分的情况。

一条带就对了，要是没切开会有好几条带的，双酶切后的小片段太短了，只有大片段的百分之几，所以亮度也只有大片段的百分之几，仪器的灵敏度也是有限的，就像肉眼看不到细菌一样，看不到不表示不存在啊。

电泳缓冲液是不是新配的啊？Marker都有问题的话，提质粒，酶切应该没问题。

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