大家好，今天小编关注到一个比较有意思的话题，就是关于bamhi载体的构建的问题，于是小编就整理了3个相关介绍bamhi载体的构建的解答，让我们一起看看吧。

1. bamh1酶切位点是什么
2. 构建重组载体时用两种限制酶切割目的基因的原因
3. 如何将两个基因构建到同一个载体上

1、bamh1酶切位点是什么

bamh1酶切位点如下：在分子克隆实验中，限制性内切酶是必不可少的工具酶。 无论是构建克隆载体还是表达载体，要根据载体选择合适的内切酶（当然，使用T载就不必考虑了）。先将引物设计好，然后添加酶切识别序列到引物5； 端。

本身功能和结构上没有变化，区别在多克隆位点198位的BamH1酶切位点，pET21a比b多了一个碱基。产生的差异在于在考虑用BamH1的同尾酶构建载体是有区别的，细节的地方你自己再看看吧。

Bamh1的酶切时间是 2-3小时。Bamh1是一种限制性内切酶。

④ 分析载体质粒的酶切位点，这里用pLvx-puro作为目的基因的载体 因此，BamHEcoR1不可使用，其他可用的有：XhoBsyBApal、Smal、Xbal 酶切的选择还需要考虑现实情况，我们组内有现货的酶： Xho1， Xbal。

2、构建重组载体时用两种限制酶切割目的基因的原因

为了防止目的基因和运载体自身环化。为保证目的基因正序插入运载体，防止反向连接。限制性核酸内切酶是可以识别并附着特定的脱氧核苷酸序列，并对每条链中特定部位的两个脱氧核糖核苷酸之间的磷酸二酯键进行切割的一类酶。

双酶切就是为了验证是否有目的基因，如果双酶切条带正确，而且PCR也没有问题，就可以确定质粒构建成功。质粒具有稳定可靠和操作简便的优点。如果要克隆较小的DNA片段（10kb）且结构简单，质粒要比其它任何载体都要好。

用不同限制酶切割的目的是：保证目的基因和质粒（运载体）的准确连接，避免无效连接过多。

构建重组质粒时并不是只用同种限制酶切割目的基因和载体，虽然理论上本应如此，一般都用同种才会容易处理，但常见的也有将两种限制性内切酶，也就是不同的限制酶进行双酶切，最后也会产生互补的黏性末端。

有两个方面，一是载体本身酶切不充分，没有完全切开；二是去磷酸化不充分。

3、如何将两个基因构建到同一个载体上

还可以用SOE-PCR法将两基因连到一起，但你要考虑载体启动子的问题，可能由于融合基因构象或启动子能力的问题无法正确表达。你可以设计双启动子。

既然要分别表达，则这两个基因应该有完整的表达元件，即：各自的启动子、终止子和翻译起始与终止元件。具有上述完整元件的基因连接在一起即可。

gateway载体一般都是含有两个交换位点attL1和attL2，这两个位点和入门载体上的attR1和attR2的交换位点分别进行重组，从而将目的基因插入到表达载体中。从这个角度来看，很难有可以插入两个基因的gateway载体。

http：//wenku.baidu.com/view/4f0d814afe4733687e21aa1d.html 当然，你把2个序列同时克隆到一个质粒也可以。可以用2个启动子分别驱动，或者串在一起，中间用核糖体结合序列相连，这样翻译的时候可以保证2者都得到翻译。

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