大家好，今天小编关注到一个比较有意思的话题，就是关于构建siRNA表达载体的问题，于是小编就整理了4个相关介绍构建siRNA表达载体的解答，让我们一起看看吧。

1. ...利用RNAi技术研究该基因的功能?RNAi载体怎么构建?
2. 什么是siRNA表达框架?
3. 构建植物siRNA有哪些表达载体?
4. 构建RNAi载体用的I型启动子和其他启动子有什么区别?用II型不行么...

1、...利用RNAi技术研究该基因的功能?RNAi载体怎么构建?

“酶切-连接”方法是通常构建RNA干扰载体最常用的方法，被广泛应用于各种生物之中。其构建过程是：通过PCR方法得到目的基因的片段（添加了合适的酶切位点），使之正反相连形成顺式片段和反式片段。

RNAi是一种高效的特异性强的基因阻断技术。可以快速分析靶基因的功能，RNAi发展迅速，已成为功能基因组研究和反向遗传学研究的有力工具。RNAi技术被《Science》杂志评为2002年度的十大科技突破。

rnai技术的基本程序主要为：确定干扰靶点、合成siRNA、转染siRNA到细胞中。确定干扰靶点：通过基因组学凳厅袜、转录组学等手段，确定需要干扰的靶基因或RNA。

RNAi是有dsRNA参与指导的，以外源和内源mRNA为降解目标的转基因沉默现象。具有核苷酸序列特异性的自我防御机制，是一种当外源基因导入或病毒入侵后，细胞中与转基因或入侵病毒RNA同源的基因发生共同基因沉默的现象。

在水稻中利用RNAi技术来验证定位的基因 。如根据定位的矮秆或多蘖基因所在的BAC设计引物 ，获得小片段cDNA ，再将其连到载体中通过农杆菌介导法导入正常的植物体内 ，让其在植物体内表达 。

2、什么是siRNA表达框架?

siRNA表达框架方法的主要缺点是：①PCR产物很难转染到细胞中（晶赛公司的Protocol可以解决这一问题）；②不能进行序列测定，PCR和DNA合成时可能差生的误读不能被发现导致结果不理想。

siRNA即小干扰RNA（Small interfering RNA），是一类长度为21-25 bp的双链RNA（dsRNA）分子，广泛用于RNA干扰技术，是高效特异的基因缺失性研究工具。

具有很高的稳定性。2． 相同的sRNA在不同细胞、不同组织器官以及不同种属之间具有相似的序列以及调控功能。3． sRNA在不同组织、不同细胞间的表达谱表现特征不同，因此sRNA表达谱可以作为某些组织或细胞的特异性分子标志。

miRNA，siRNA，shRNA的区别在于：miRNA的主要功能是下调基因的表达；siRNA其主要在RNAi通路中起作用，干扰特异基因的表达；shRNA常被用于RNA干扰沉默靶基因的表达。

siRNA（全写：SmallinterferingRNA）是一种小RNA分子（约21-25核苷酸），由Dicer（RNAaseⅢ家族中对双链RNA具有特异性的酶）加工而成，SiRNA是siRISC的主要成员，激发与之互补的目标mRNA的沉默。

3、构建植物siRNA有哪些表达载体?

体内转录：最近有几个研究小组构建了一些可以在真核细胞内表达siRNA的载体，包括被广泛应用的质粒载体和新研发的转染效率较高的病毒载体。

siRNA表达框架：siRNA表达框架（siRNA：expression：cassettes，SECs）是一种由PCR得到的siRNA表达模版，包括一个RNA：polⅢ启动子，一段发夹结构siRNA，一个RNA：polⅢ终止位点，能够直接导入细胞进行表达而无需事前克隆到载体中。

获得了PVY的复制酶NIb基因和雪花莲凝集素GNA基因插入载体；构建了植物表达载体pBinGD，经分别转入烟草K326和马铃薯紫花白后获得了抗病毒、抗介体的双价转基因植物。

多数的siRNA表达载体依赖RNA聚合酶III 启动子（pol III）中的一种，操纵一段45—50nt的发夹结构RNA（small hairpin RNA， shRNA）在哺乳动物细胞中的表达，shRNA在细胞内会自动被加工成为siRNA，从而引发基因沉默或者表达抑制。

磷酸钙共沉淀；电穿孔法；DEAE-葡聚糖和polybrene；机械法；阳离子脂质体试剂。

4、构建RNAi载体用的I型启动子和其他启动子有什么区别?用II型不行么...

它不必有强启动子，因为不重于表达。表达载体是基因克隆结束后，为了在特定细胞内表达而构建的。他重点在于表达，有各种各样的启动子适应于不同种类的细胞，并且有各种各样，如诱导等可控的表达调控方式。

肝细胞中表达的高活性启动子使小鼠过表达OPG （osteoprotegerin） 基因，得到的转基因小鼠的骨密度 明显高于正常小鼠，说明该基因参与骨质合成[4 ] 。

第一种可以直接或经由其他中介蛋白质的作用，而与负责转录的RNA聚合酶结合，再使聚合酶与启动子结合，并开启转录作用。第二种则与专门修饰组织蛋白的酵素结合于启动子上，使脱氧核糖核酸模板与聚合酶发生接触的难度改变。

在RNA复制酶作用下，按5；→3；方向合成互补的RNA分子。但RNA复制酶中缺乏校正功能，因此RNA复制时错误率很高，这与反转录酶的特点相似。RNA复制酶只对病毒本身的RNA起作用，而不会作用于宿主细胞中的RNA分子。

mRNA tRNA rRNA的区别：功能不同：rRNA是组成核糖体的主要成分。核糖体是合成蛋白质的工厂。rRNA一般与核糖体蛋白质结合在一起，形成核糖体（ribosome）。tRNA是分子最小的RNA，又称转运RNA。

关于构建siRNA表达载体和sirna质粒载体构建的介绍到此就结束了，不知道你从中找到你需要的信息了吗 ？如果你还想了解更多这方面的信息，记得收藏关注本站。 构建siRNA表达载体的介绍就聊到这里吧，感谢你花时间阅读本站内容，更多关于sirna质粒载体构建、构建siRNA表达载体的信息别忘了在本站进行查找喔。