大家好，今天小编关注到一个比较有意思的话题，就是关于构建载体大肠杆菌不长的问题，于是小编就整理了5个相关介绍构建载体大肠杆菌不长的解答，让我们一起看看吧。

1. 用lb培养基划线大肠杆菌菌液不长是为什么
2. 质粒转化大肠杆菌不长菌怎么回事
3. 为什么培养基培养了一周都没有菌落长出呢?
4. 为什么用大肠杆菌涂板时老不长菌?
5. 载体的构建转大肠不长斑是什么情况

1、用lb培养基划线大肠杆菌菌液不长是为什么

多半是：挑的菌有问题。可能没挑到，也可能挑的菌没有对抗生素的抗性，或者挑的是杂菌。培养基，一般不会出现问题。除非是同批次的都很清澈。

其次，芽孢杆菌酵母放线菌等在LB中也能生长，你的平板没有菌落的话可能与土壤样品有关。

培养基方面主要灭菌，而且加过氨苄的培养基不要放置过长时间最好不要放置超过一周。操作环境方面主要确保无菌操作。

是否菌液中抗生素浓度加的过高？2 是否培养时间不够？（因为我们培养常常要超过20个小时，在高浓度抗生素平板上长出菌不容易啊！）3 是否导入质粒失败？也可能跟你转化的质粒有关。

菌液是否足够，如果是转化的菌，质粒浓度是否足够，感受态是否制备无误。 涂布器是不是烧过之后直接接触了菌液。

2、质粒转化大肠杆菌不长菌怎么回事

转化效率太低：在转化时，可以设立阳性对照，判断转化实验是否正常。要是阳性对照也长不出菌落，证明转化实验没有成功。

第一个不是问题，PCR保温就是为了保护DNA不被破坏。第二个是问题，和我以前遇到的情况很相似，我做的是RbCl2的EPI300感受态，当时没放冰水混合物冰浴，直接丢到-20C冰箱，结果结冰，导致转化率大幅下降。

可能存在两个问题，1，没有染菌，但出现发酵过程中质粒丢失。不知道你在上罐的时候是否加压？可以试一下。2，存在染菌，上罐就出现这种情况，可能是培养基没有灭彻底，或者是发酵罐中存在灭菌死角，还有就是空气过滤系统。

可能是转化效率低吧，或者虽然质粒转进去了，但生产的缺陷蛋白不能满足宿主细胞生长的需要，就长得慢了。

菌液是否足够，如果是转化的菌，质粒浓度是否足够，感受态是否制备无误。 涂布器是不是烧过之后直接接触了菌液。

3、为什么培养基培养了一周都没有菌落长出呢?

样本本身无菌。培养基过期失效。培养箱故障。实验器皿未清洗彻底，残留抑菌成分。培养时间不足。

因为划平板时细菌（或其他微生物）是接种在培养基表面的，自然先在表面生长，等表面的培养基消耗了，就会往下生长，不一定是由于表面有空气，因为微生物也有厌氧型的。

可能是温度不够，或是时间太短，水分不足。现在干燥低气温下食物放一天也不会坏。

物体表面微生物监测没有培养出菌落的原因可能有以下几种情况： 低生物负荷：物体表面上的微生物数量非常少，无法在培养基上生长形成可见的菌落。这可能是由于物体表面清洁程度高，或者物体受到了抗菌处理，如常见的消毒操作。

4、为什么用大肠杆菌涂板时老不长菌?

可能的原因有很多啊，比如说抗生素加错了，涂板出问题了，培养条件不适宜等等。

虽然可能性不大，但是还是有这个可能，就是你同学说的：感染了噬菌体。感染噬菌体后会形成噬菌斑。不是感染了噬菌斑，呵呵。

可能原因： 感受态效率低 培养基抗生素加的不对或者量加错。涂平板时涂布棒没有充分冷却。连接效率低。

可能原因有很多，需要现场具体情况具体分析。例如，菌液中的细菌已经死亡，操作不当，培养条件不对，培养基质量问题等等。大肠杆菌的营养要求实际上并不高，使用普通营养条件的培养基，就可以比较容易地将其培养出来。

5、载体的构建转大肠不长斑是什么情况

大片段载体构建时的大肠杆菌形成是不是慢 DNA片段的克隆需要合适的载体，载体或是质粒，或是噬菌体，或是病毒，通常大多经过人工改造[地的。

构建载体时，转化过后不长菌的原因：转化的时候有误，可以重新实验。

色斑的成因包括外部和内部因素。外部因素有阳光紫外线、环境污染、过度使用化妆品和电器辐射等；内部因素则包括生活和工作压力、情绪波动、内分泌失调和代谢问题等。

第一个不是问题，PCR保温就是为了保护DNA不被破坏。第二个是问题，和我以前遇到的情况很相似，我做的是RbCl2的EPI300感受态，当时没放冰水混合物冰浴，直接丢到-20C冰箱，结果结冰，导致转化率大幅下降。

大肠杆菌为原核生物，原核生物的基因序列中不含有内含子，也就没有内含子的剪切机制，而真核生物中获得的完整的基因片段中一定是含有内含子的，（mRNA中不含）所以，在表达上会有差异。

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