大家好，今天小编关注到一个比较有意思的话题，就是关于构建载体农杆菌的问题，于是小编就整理了3个相关介绍构建载体农杆菌的解答，让我们一起看看吧。

1. 农杆菌转化法的原理
2. 目的基因的表达载体的农杆菌在什么培养基上培养?
3. 农杆菌转化实验步骤

1、农杆菌转化法的原理

农杆菌转化法的原理是构建双元表达载体系统，由两种质粒组成，一种是位于大肠杆菌中的穿梭质粒，另一种是位于农杆菌中的辅助性质粒。

农杆菌转化法的过程如下：转化：目的基因插入Ti质粒的T-DNA上--进入农杆菌--导入植物细胞--目的基因整合到植物染色体的DNA上--目的基因得以稳定维持和表达。获取目的基因：用限制性核酸内切酶切割下目的基因。

农杆菌转化法是将目的基因导入植物细胞采用最多的方法。农杆菌是一种在土壤中生活的微生物，能在自然条件下感染双子叶植物和裸子植物，而对大多数单子叶植物没有感染能力。

双子叶植物或裸子植物受损伤时伤口处分泌酚类化合物，吸引农杆菌，农杆菌通过侵染植物伤口进入细胞后，可将T-DNA插入到植物基因组中与目的基因同时表达，并且可以通过减数分裂稳定的遗传给后代。

2、目的基因的表达载体的农杆菌在什么培养基上培养?

在固体培养基上，植物细胞可以更好地吸收营养物质，并保持其活力和稳定性。农杆菌在固体培养基上生长时，可以更好地与植物细胞相互作用，促进遗传转化的效率。

农杆菌侵染植物细胞时用大肠杆菌培养基培养基。

将发根农杆菌在YEB平板上划线培养。挑取单菌落接种于20ml YEB液体培养基中，20℃，200rpm条件下振荡培养，至OD600值为0.6-0.8。

农杆菌培养至适当浓度。受体材料消毒处理并切成适当大小组织块。组织块浸泡于菌液中适当的时间。浸泡过的组织块放于共培养基上培养。组织块转移到筛选培养基上培养，选出阳性幼苗。

3、农杆菌转化实验步骤

农杆菌转化法详细过程如下：获得目的基因：用限制性内切酶切割目的基因。基因工程示意图。基因表达载体的构建：目的基因与载体（多为质粒）通过DNA连接酶连接。

农杆菌培养至适当浓度。受体材料消毒处理并切成适当大小组织块。组织块浸泡于菌液中适当的时间。浸泡过的组织块放于共培养基上培养。组织块转移到筛选培养基上培养，选出阳性幼苗。

获取目的基因：用限制性核酸内切酶切割下目的基因。基因表达载体的构建：将目的基因与载体（大多数选用质粒）用DNA连接酶连接起来。将目的基因导入受体细胞：将含目的基因的重组质粒导入农杆菌（农杆菌为受体细胞）。

．植株转化实验：农杆菌与植物细胞的共培养，在溶液中加入促进植株愈伤生长的激素能一定程度提高转化率。转化细胞的筛选，大多是利用抗生素进行筛选的，抗生素的选择则需根据目的载体确定。同时进行利用抗生素完成脱菌的过程。

到此，以上就是小编对于构建载体农杆菌的问题就介绍到这了，希望介绍关于构建载体农杆菌的3点解答对大家有用。