大家好，今天小编关注到一个比较有意思的话题，就是关于如何构建ti表达载体的问题，于是小编就整理了3个相关介绍如何构建ti表达载体的解答，让我们一起看看吧。

1. 致瘤土壤杆菌Ti质粒基因转化载体的构建是怎样的?
2. 我们该如何改造野生型Ti质粒才可以用于基因工程的转化载体?
3. 如何进行植物基因工程中的载体构建

1、致瘤土壤杆菌Ti质粒基因转化载体的构建是怎样的?

ti质粒是在根瘤土壤杆菌细胞中存在的一种核区DNA外的自主复制的环形双链DNA分子。质粒是一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA之外，并具有自我复制能力的很小的双链环状DNA分子。

．基因表达载体的构建：将目的基因与载体（Ti质粒）用DNA连接酶连接起来。3．将重组DNA分子导入农杆菌：将含目的基因的重组质粒导入农杆菌， 此农杆菌和提供Ti质粒的农杆菌应该不同。

转化：目的基因插入Ti质粒的T-DNA上--进入农杆菌--导入植物细胞--目的基因整合到植物染色体的DNA上--目的基因得以稳定维持和表达。获取目的基因：用限制性核酸内切酶切割下目的基因。

是由大肠杆菌质粒插入T-DNA片段、目的基因和标记基因等构建而成。（3）中间表达载体：是含有植物特异启动子的中间载体。是构建转化载体的质粒。（4）卸甲载体：是解除武装的Ti质粒或Ri质粒，是构建转化载体的受体质粒。

几乎所有双子叶植物都容易受到土壤农杆菌感染，而产生根瘤。它是一种革兰氏阴性菌（A. tumefaciens）。其致瘤特性是由Ti（tumor－inducing）质粒介导的。

2、我们该如何改造野生型Ti质粒才可以用于基因工程的转化载体?

一切基因工程载体都是由某种细菌质粒或病毒来充任，而在众多的载体中目前仅有Ti质粒在转化植物受体方面取得较多的成功。所以Ti质粒是当前植物基因工程中最常用的载体系统。

为了使Ti质粒成为有效的外源基因导入载体，就需要对野生型Ti质粒进行改造，切除致瘤基因，使之成为“卸甲”载体（disarmedvector）。

所以Ti质粒是诱发植物肿瘤的质粒。根据Ti质粒能够进入植物细胞并能整合到植物染色体DNA分子中的功能，将外源基因装入到Ti质粒，形成杂合Ti质粒并转入农杆菌中，然后该农杆菌感染植物细胞，从而形成转基因植物。

农杆菌介导法 农杆菌的Ti质粒可以作为载体。Ti质粒上有两个区域，一个是T-DNA区，这是能够转移并整合进植物受体的区段；另一个是Vir区，它编码实现质粒转移所需的蛋白质。

载体转化系统（Ti质粒转化载体、Ri质粒转化载 体、病毒转化载体） l DNA直接导入转化系统（原生质体、基因枪） l 种质转化系统（花粉管通道法、生殖细胞浸泡法、 胚囊子房注射法）。

3、如何进行植物基因工程中的载体构建

①用它作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞中去。②利用他在宿主细胞内对目的基因进行大量的复制（称为克隆）。理想的运载体是质粒（plasmid），在基因工程中，常用人工构建的质粒作为载体。

载体构建：将目的基因通过酶连接到一个特定质粒分子上，构成一个插入目的片段的新的质粒分子。 遗传转化：最简单的花序浸染，常用的农杆菌转化、基因枪轰击，还有花粉管通道等。

载体构建的方法：将外源DNA片段与线性化的质粒进行连接，形成重组质粒。使用适当的转化方法将构建好的质粒转化到目标细胞中，使其能够进入细胞内。

在植物基因工程研究中，这些人工组建的启动子发挥了重要作用。

转化：利用农杆菌介导转化或基因枪等方法，将含有目标基因的载体导入大白菜的叶片、组织或胚胎。 再生：利用植物组织培养技术，培养转基因组织并再生成整株植物。

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