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1. 原核表达载体的构建要几天
2. 载体构建摇菌时间
3. 构建载体连接时间最短多长

1、原核表达载体的构建要几天

构建人resistin基因原核表达载体并观察其表达，为开展对resistin的研究打下实验基础。

目的基因重组表达载体的构建及在原核中的表达是生物技术领域的重要研究内容。目的基因重组表达载体的构建是将目的基因与适当的调控序列（如启动子、转录终止信号序列等）和标记基因连接在一起，形成重组表达载体。

rna聚合酶高5倍左右，它能使质粒沿模板连续转录几周，许多外源终止子都不能有效地终止它的序列，因此它可转录某些不能被大肠杆菌rna聚合酶有效转录的序列。这个系统可以高效表达其他系统不能有效表达的基因。

你想问基因表达载体的构建，这个问题太大，而且表达载体多种多样，用处也很多，所以很难一下子概况。

2、载体构建摇菌时间

摇菌的大摇时间要求一般不是很严格，通常12到16小时，不过可以随时观察，看菌液变混浊了就差不多了。摇菌的小摇时间要求是不低于12个小时即可。

摇菌的时间要求一般不是很严格，通常12至16小时，摇菌还分为大摇和小摇，大摇时间为16个小时，小摇时间为12个小时。摇菌是用来一种培养细菌的方法，有时候是1：1000是不影响菌种活力。

-24小时左右。摇菌是将细菌接种到液体培养基中，然后通过摇晃的方式使细菌在培养基中均匀分布，以促进其生长和繁殖的过程。摇菌的时间因细菌的种类、培养条件和实验目的而异，一般来说，摇菌的时间在12-24小时左右。

连接后要转化进大肠杆菌感受态中。37℃ 200rpm 摇菌一个小时。（6）之后涂布至固体培养基上。

3、构建载体连接时间最短多长

分钟可完成连接反应。在进行DNA重组时，将目的基因连接到零背景载体上所需的时间。由于零背景载体本身是一种高效的限制性内切酶位点缺失的载体，可以避免背景杂交的问题，因此在30分钟可完成连接反应。

在20 μl的连接反应体系中，6 μg的λDNA-Hind III的分解物在16℃下反应30分钟时，有90%以上的DNA片段被连接所需要的酶量定义为1个活性单位（U）。

小时。平末端（bluntend）的连接5’端与3’端并列靠近的时间太短，不容易被连接酶连接。T4DNA连接酶虽然能连接平末端，但效率很低只有粘性末端的效率很低，通常连载时间为小时。

目的片段和载体的质量最好高一些。2）按照常规连接体系进行，一般20ul体系。3）连接温度20-25度。由于平端连接不涉及粘性末端的互补，所以温度可以高一些。4）酶的用量不要过量，按照说明就可以。

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