大家好，今天小编关注到一个比较有意思的话题，就是关于构建载体时如何选择的问题，于是小编就整理了4个相关介绍构建载体时如何选择的解答，让我们一起看看吧。

1. 说明构建文库时和作基因表达时应如何选择分子克隆载体和宿主菌细胞...
2. 怎样选择基因工程研究中的载体
3. 构建cDNA文库时,比较好的载体是 A.质粒 B.入gt10 C.Ti质粒 D.BAC_百 ...
4. 基因表达载体的构建过程中必须遵循哪些原则?

1、说明构建文库时和作基因表达时应如何选择分子克隆载体和宿主菌细胞...

①能在宿主细胞中复制繁殖，而且最好要有较高的自主复制能力。②容易进入宿主细胞，而且进入效率越高越好。③容易插入外来核酸片段，插入后不影响其进入宿主细胞和在细胞中的复制。

由于分子克隆载体的大小决定外源DNA插入片段的大小，两者呈反比关系，因而在建立载体时千方百计地减小载体分子量。对于穿梭载体，因为复制起点和标记基因具有生物特异性，所以载体上需要同时具有两个以上的复制起点和标记基因。

表达载体：在克隆载体基本骨架的基础上增加表达元件（如启动子、RBS、终止子等），使目的基因能够表达的载体。

载体　所谓载体是指携带靶DNA片段进入宿主细胞进行扩增和表达的工具。

在构建载体，选择宿主细胞、设计分子克隆方案时都必须仔细考虑筛选的问题。以下就常用技术的基本原理加以介绍。

2、怎样选择基因工程研究中的载体

对理想的基因工程载体一般至少有以下几点要求：①能在宿主细胞中复制繁殖，而且最好要有较高的自主复制能力。②容易进入宿主细胞，而且进入效率越高越好。③容易插入外来核酸片段，插入后不影响其进入宿主细胞和在细胞中的复制。

最常见的选择标记为抗生素抗性基因，包括：氨苄西林、氯霉素、卡那霉素、新霉素 3．多克隆位点：质粒是小型环状DNA分子，在基因工程中作为最常用，最简单的载体，必须包括三部分：遗传标记基因，复制区，目的基因。

载体一般选用大肠杆菌的质粒（小型环状DNA）或者噬菌体，植物用烟草花叶病毒。载体的要求是要有切割位点结合位点，复制起点和标记基因的位点。然后根据宿主的特性选用不同的载体。

具有复制起始点。首先，能在细菌中稳定存在，有较高的拷贝数，具有选择标记的每一个标记基因都含有单一的酶切位点。其次，在复制时，需在特定的位点起始，具有特定核苷酸排列顺序的片段，即复制起始点。

有的质粒的可以整合到宿主细胞染色质DNA中，随宿主DNA复制，称为附加体，例如细菌的性质粒就是一种附加体，它可以质粒形式存在，也能整合入细菌的DNA，又能从细菌染色质DNA上切下来。

3、构建cDNA文库时,比较好的载体是 A.质粒 B.入gt10 C.Ti质粒 D.BAC_百 ...

质粒载体可用于生物cDNA文库构建。但只适合于高丰度的mRNA。（2）． 噬菌体文库 目前用于基因克隆的噬菌体载体及其衍生载体很多，如单链的M13噬菌体载体、λ噬菌体载体、P1噬菌体载体、噬菌粒（phagemid或phasmid）等。

. Sephadex G-50用含有10 mmol/L NaCl的TE（pH6）溶液进行平衡，然后通过离子柱层析将未掺入的dNTP和cDNA分开。

构建基因组文库的步骤A 分离基因组DNA；B 用超声波或限制酶等进行基因组DNA部分或完全降解；C 将降解物进行分级得到所需大小DNA片段；D 将DNA片段与载体连接（一般用λ噬菌体载体）；E 将重组体导入宿主细胞；F 最后筛选鉴定重组子克隆。

静置10min。6．按NaOH（0.4N）：SDS（2%）--1：1的比例新鲜配制溶液Ⅱ，加入20ml溶液Ⅱ，静置3-5min。注： 静置时间勿超过5min，提前将溶液Ⅲ置于冰盒中。7．加入15ml冰浴的溶液Ⅲ，冰浴15-30min。

4、基因表达载体的构建过程中必须遵循哪些原则?

切割质粒和目的基因的限制酶必须是同-.种酶，以获得相同的黏性末端，利于重组质粒的构建。插入的目的基因只是结构基因部分，其表达需要调控序列，因而用作载体的质粒的插入部位前须有启动子，后须有终止子。

作为一个基因表达载体，必须要满足以下条件：细菌的复制起始位点Ori；用来对转入质粒的细菌进行筛选的抗性基因比如：Kan Amp spec 等抗性筛选基因。

应用t7噬菌体表达系统需要2个条件：第一是具有t7噬菌体rna聚合酶，它可以由感染的l噬菌体或由插入大肠杆菌染色体上的一个基因拷贝产生；第二是在一个待表达基因上游带有t7噬菌体启动子的载体。

构建条件：必须能够在宿主细胞中复制，使重组基因能够在宿主基因中复制，从而稳定保存下来，这是作为运载体的必须条件。具有多个限制酶切点，从而可以使不同的粘性末端与之相连，增强实用性。

就可以作为筛选的标记基因。一般来说，天然运载体往往不能满足上述要求，因此需要根据不同的目的和需要，对运载体进行人工改建。当前所使用的质粒载体几乎都是经过改建的。载体DNA分子大小应合适，以便操作。

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