大家好，今天小编关注到一个比较有意思的话题，就是关于sirna载体构建和细胞导入的问题，于是小编就整理了4个相关介绍sirna载体构建和细胞导入的解答，让我们一起看看吧。

1. 什么是siRNA表达框架?
2. 有哪些方法可以将sirna导入细胞内
3. ...利用RNAi技术研究该基因的功能?RNAi载体怎么构建?
4. siRNA的导入细胞有哪些方法?

1、什么是siRNA表达框架?

siRNA表达框架方法的主要缺点是：①PCR产物很难转染到细胞中（晶赛公司的Protocol可以解决这一问题）；②不能进行序列测定，PCR和DNA合成时可能差生的误读不能被发现导致结果不理想。

siRNA即小干扰RNA（Small interfering RNA），是一类长度为21-25 bp的双链RNA（dsRNA）分子，广泛用于RNA干扰技术，是高效特异的基因缺失性研究工具。

具有很高的稳定性。2． 相同的sRNA在不同细胞、不同组织器官以及不同种属之间具有相似的序列以及调控功能。3． sRNA在不同组织、不同细胞间的表达谱表现特征不同，因此sRNA表达谱可以作为某些组织或细胞的特异性分子标志。

miRNA，siRNA，shRNA的区别在于：miRNA的主要功能是下调基因的表达；siRNA其主要在RNAi通路中起作用，干扰特异基因的表达；shRNA常被用于RNA干扰沉默靶基因的表达。

siRNA（全写：SmallinterferingRNA）是一种小RNA分子（约21-25核苷酸），由Dicer（RNAaseⅢ家族中对双链RNA具有特异性的酶）加工而成，SiRNA是siRISC的主要成员，激发与之互补的目标mRNA的沉默。

2、有哪些方法可以将sirna导入细胞内

将sirna导入细胞内常见的方法是 将靶向特定基因的大约21碱基长短的双链 siRNAs small interfering RNAs。或者是45 50 mer的发夹结构 RNA 转染到细胞。此外通过质粒表达siRNAs 同样可以抑制特定基因的表达。

机械法：转染技术也包括使用机械的方法，比如显微注射和基因枪（biolistic：particle）。显微注射使用一根细针头将DNA、RNA或蛋白直接转入细胞质或细胞核。基因枪使用高压微弹（microprojectile）将大分子外源DNA导入细胞。

磷酸钙共沉淀；电穿孔法；DEAE-葡聚糖和polybrene；机械法；阳离子脂质体试剂。

电穿孔法：电穿孔通过将细胞暴露在短暂的高场强电脉冲中转导分子。将细胞悬浮液置于电场中会诱导沿细胞膜的电压差异，据认为这种电压差异会导致细胞膜暂时穿孔。

3、...利用RNAi技术研究该基因的功能?RNAi载体怎么构建?

“酶切-连接”方法是通常构建RNA干扰载体最常用的方法，被广泛应用于各种生物之中。其构建过程是：通过PCR方法得到目的基因的片段（添加了合适的酶切位点），使之正反相连形成顺式片段和反式片段。

RNAi是一种高效的特异性强的基因阻断技术。可以快速分析靶基因的功能，RNAi发展迅速，已成为功能基因组研究和反向遗传学研究的有力工具。RNAi技术被《Science》杂志评为2002年度的十大科技突破。

rnai技术的基本程序主要为：确定干扰靶点、合成siRNA、转染siRNA到细胞中。确定干扰靶点：通过基因组学凳厅袜、转录组学等手段，确定需要干扰的靶基因或RNA。

RNAi是有dsRNA参与指导的，以外源和内源mRNA为降解目标的转基因沉默现象。具有核苷酸序列特异性的自我防御机制，是一种当外源基因导入或病毒入侵后，细胞中与转基因或入侵病毒RNA同源的基因发生共同基因沉默的现象。

在水稻中利用RNAi技术来验证定位的基因 。如根据定位的矮秆或多蘖基因所在的BAC设计引物 ，获得小片段cDNA ，再将其连到载体中通过农杆菌介导法导入正常的植物体内 ，让其在植物体内表达 。

4、siRNA的导入细胞有哪些方法?

将sirna导入细胞内常见的方法是 将靶向特定基因的大约21碱基长短的双链 siRNAs small interfering RNAs。或者是45 50 mer的发夹结构 RNA 转染到细胞。此外通过质粒表达siRNAs 同样可以抑制特定基因的表达。

机械法：转染技术也包括使用机械的方法，比如显微注射和基因枪（biolistic：particle）。显微注射使用一根细针头将DNA、RNA或蛋白直接转入细胞质或细胞核。基因枪使用高压微弹（microprojectile）将大分子外源DNA导入细胞。

电穿孔法：电穿孔通过将细胞暴露在短暂的高场强电脉冲中转导分子。将细胞悬浮液置于电场中会诱导沿细胞膜的电压差异，据认为这种电压差异会导致细胞膜暂时穿孔。

dsRNA可以是外源的， 如病毒RNA复制中间体或人工导入的dsRNA；也可以是内源的， 如细胞中单链RNA在RNA依赖的RNA聚合酶的作用下形成的dsRNA 。

外源基因进入细胞主要有四种方法：电击法、磷酸钙法和脂质体介导法和病毒介导法。

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