大家好，今天小编关注到一个比较有意思的话题，就是关于拟南芥载体构建的问题，于是小编就整理了5个相关介绍拟南芥载体构建的解答，让我们一起看看吧。

1. 设计一个实验,构建一个用大肠杆菌表达拟南芥基因 MS2的载体。
2. 如何构建载体
3. 拟南芥原生质体转化载体都有哪些
4. 什么叫过表达载体?
5. 拟南芥转化技巧

1、设计一个实验,构建一个用大肠杆菌表达拟南芥基因 MS2的载体。

首先要用一定的限制酶切割质粒，使质粒出现一个缺口，露出黏性末端。用同一种限制酶切断目的基因，使其产生相同的黏性末端。

植物转基因载体和这些酶都是非常常用的试剂。载体构建好之后需要把它们导入大肠杆菌中复制，这里就要用到大肠杆菌的感受态了，十把构建好的载体和感受态混合，然后放到42度热水处理个1分钟，再冰上放个3分钟。

l PCR 反应条件为：94℃变性 3min；94℃变性 3min、52℃复性40sec、72℃ 延伸1min，30个循环；最后72℃延伸8min。

克隆质粒载体的构建：首先将目的基因的编码序列与质粒载体的复制子序列连接，构建出重组质粒。然后通过转化将重组质粒导入大肠杆菌中，筛选出含有重组质粒的菌落。

通过大肠杆菌表达目的基因大量获得重组蛋白是一个方便快捷的方法。植物中克隆的目的基因被克隆到特异设计的质粒载体上，受噬菌体T7强启动子控制；表达由宿主细胞提供的T7 RNA聚合酶诱导。

2、如何构建载体

②利用他在宿主细胞内对目的基因进行大量的复制（称为克隆）。理想的运载体是质粒（plasmid），在基因工程中，常用人工构建的质粒作为载体。

选择合适的载体：根据实验目的和需要，选择适合的载体。常用的载体有质粒、噬菌体、病毒等。 设计引物：根据目标基因的序列，设计合适的引物。引物的设计需要考虑其特异性、长度、GC含量等因素。

首先要用一定的限制酶切割质粒，使质粒出现一个缺口，露出黏性末端。用同一种限制酶切断目的基因，使其产生相同的黏性末端。

载体构建的方法：将外源DNA片段与线性化的质粒进行连接，形成重组质粒。使用适当的转化方法将构建好的质粒转化到目标细胞中，使其能够进入细胞内。

“酶切-连接”方法是通常构建RNA干扰载体最常用的方法，被广泛应用于各种生物之中。其构建过程是：通过PCR方法得到目的基因的片段（添加了合适的酶切位点），使之正反相连形成顺式片段和反式片段。

3、拟南芥原生质体转化载体都有哪些

主要实验结果如下： 拟南芥叶肉原生质体分离的最优酶液组成及浓度。

只有一种。原生质体是除去细胞壁的裸露细胞，所以叶肉细胞只有它自己一种原生质体，即被除去细胞壁的叶肉细胞。植物细胞用果胶酶以及纤维素酶处理后，可除去细胞壁，形成仅由细胞膜包住细胞质的体系。

农杆菌GV3101重组菌株，重组双元表达载体pCAMBIA1300 ，拟南芥 实验步骤 1．在转化前三天，接种含有双元载体的农杆菌到5ml含有抗 生素（庆大霉素20mg/L，卡那霉素50mg/L）的LB液体培 养基中，28℃下震荡培养2天。

选择合适的表达载体是构建转基因拟南芥的第一步。有很多很好的选择，但这里有几个我最喜欢的选择。

载体转化系统（Ti质粒转化载体、Ri质粒转化载 体、病毒转化载体） l DNA直接导入转化系统（原生质体、基因枪） l 种质转化系统（花粉管通道法、生殖细胞浸泡法、 胚囊子房注射法）。

4、什么叫过表达载体?

图 过表达载体构建示意图目前已从动物、植物、病毒及微生物中分离到许多适用于植物的启动子。

性质和特性，根据查询懂视网信息得知。沉默载体是指是一种序列特异的转录后基因沉默现象，基因过表达载体是将目的基因编码区序列克隆到相应的质粒或病毒载体上。

过表达是指将目的基因的全长序列与高活性组成型启动子融合构建成质粒载体，通过转化，获得该基因产物大量积累的生物体。基因过表达的作用主要与基因本身编码蛋白的功能有关。

组成成分：表达载体通常包含目的基因、启动子、终止子、复制原点、标记基因等，而过表达载体中除了包含这些基本组件外，往往还加入了一些能使目的基因高水平表达的增强子元件或其他调控元件。

基因过表达载体 将目的基因编码区序列（CDS）克隆到相应的质粒或病毒载体上，利用骨架上构建的启动子驱动目的基因表达，此外，可选择报告基因进行示踪或抗性基因进行筛选。

5、拟南芥转化技巧

这个过程本身很简单。当你的农业细菌培养做好准备后，将它们向下旋转，并将它们重新悬挂在转化介质中。如果你在浸泡你的植物，把培养放进一个足够宽的容器里，把你的植物的花浸在里面。

日常使用浸花法（floral dip method）（Clough等，1998）转化拟南芥。

在箱底撒水保湿，然后将花盆平放到箱子中，并用塑料袋罩住箱子暗培养16-24h（过夜）后，将拟南芥放置于塑料培养池内，并浇足horgland营养液，恢复正常培养。

在拟南芥蘸花转化前，需要将盛开的花朵和角果剪掉，这是因为这些部分可能已经错过了转化的最佳时期，而且可能会影响实验的准确性。具体来说，当拟南芥的花朵盛开时，其生殖细胞已经形成并且开始成熟。

选择内质网膜内嵌蛋白SIP及肌动蛋白相关蛋白ARP6进行研究。通过RT-PCR扩增得到SIP（720bp）基因及ARP6（1200bp）基因，再将它们分别构建到瞬时表达载体pA7-YFP上，用PEG法将其转化入拟南芥叶肉原生质体进行表达。

关于拟南芥载体构建和拟南芥结构模式图的介绍到此就结束了，不知道你从中找到你需要的信息了吗 ？如果你还想了解更多这方面的信息，记得收藏关注本站。 拟南芥载体构建的介绍就聊到这里吧，感谢你花时间阅读本站内容，更多关于拟南芥结构模式图、拟南芥载体构建的信息别忘了在本站进行查找喔。