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1. 构建载体时,比如过表达载体,35S启动子后边是连基因的CDS还是cDNA?
2. 设计引物用cds序列和cdna序列的区别
3. 基因表达载体的构建所需的条件

1、构建载体时,比如过表达载体,35S启动子后边是连基因的CDS还是cDNA?

在进行PCR之前，需要 ① 先针对自己的基因设计对应的 引物； ②提取与所需表达的基因同源的细胞或组织中的RNA，并经过RT程序将其转化为 cDNA； ③PCR扩增 出 所需要的基因片段。引物设计部分可参照前文。

当拿到一个基因的DNA片段后，就需要把它导入一个载体，一方面长期保存。另一方面也需要以载体为媒介将基因导入受体细胞中。基因表达载体的构建是基因工程的核心。常用的载体有细菌质粒，噬菌体和动植物病毒。其中质粒载体最常用。

构建cDNA文库时，需要将双链cDNA与表达载体连接起来，以便将目标基因表达出来。

是什么的引物，目的是什么？如果是检测基因的mRNA表达水平，可以逆转录，设计cDNA（cDNA包括5’和3’的非编码区和CDS序列）的引物进行RT-qPCR；如果是构建基因表达载体，就要根据CDS的序列进行引物设计。

cDNA文库显然比基因组DNA文库小得多，能够比较容易从中筛选克隆得细胞特异表达的基因。

2、设计引物用cds序列和cdna序列的区别

是什么的引物，目的是什么？如果是检测基因的mRNA表达水平，可以逆转录，设计cDNA（cDNA包括5’和3’的非编码区和CDS序列）的引物进行RT-qPCR；如果是构建基因表达载体，就要根据CDS的序列进行引物设计。

CDS和cDNA之间的关键区别在于，CDS或编码序列是转录本中实际翻译成蛋白质的部分，为转录本 而cDNA序列是通过反转录从mRNA中衍生出来的DNA序列。cDNA是通过反转录从mRNA获得的DNA序列。

而CDS是检查cDNA后得到的编码组合序列，和实际情景比较接近。

对绝大多数基因而言，基因组DNA和cDNA差别很大，序列上有内含子的区别。首先你得明确你要什么，你要的片段在基因组和cDNA中的什么位置。

由于cDNA文库的复杂性和测序的随机性，有时多个EST代表同一基因或基因组，将其归类形成EST簇（EST clusteF）CDS是Coding sequence的缩写，是编码一段蛋白产物的序列，是结构基因组学术语。

3、基因表达载体的构建所需的条件

作为一个基因表达载体，必须要满足以下条件：细菌的复制起始位点Ori；用来对转入质粒的细菌进行筛选的抗性基因比如：Kan Amp spec 等抗性筛选基因。

构建条件：必须能够在宿主细胞中复制，使重组基因能够在宿主基因中复制，从而稳定保存下来，这是作为运载体的必须条件。具有多个限制酶切点，从而可以使不同的粘性末端与之相连，增强实用性。

必须能够在宿主细胞中复制，使重组基因能够在宿主基因中复制，从而稳定保存下来，这是作为运载体的必须条件。

首先，能在细菌中稳定存在，有较高的拷贝数，具有选择标记的每一个标记基因都含有单一的酶切位点。其次，在复制时，需在特定的位点起始，具有特定核苷酸排列顺序的片段，即复制起始点。

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