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1. 基因结构中的ATG、TAA什么意思
2. 构建基因表达载体时
3. 基因表达载体的构建必须需要外显子和内含子吗?
4. 基因表达载体的构建所需的条件
5. 融合蛋白表达载体如何构建

1、基因结构中的ATG、TAA什么意思

起始：ATG，终止：TGA，TAA，TAG，指的是被转录的DNA上与遗传密码相对应的序列。终止密码： UAG，UAA，UGA是终止密码子。相应的DNA上的终止密码子序列是TAG，TAA，TGA。

编码区： 不连续的基因结构，包含外显子和内含子，它们交替出现。CDS序列以ATG开始，起始密码子只有这一个，并且在外显子中。（1）外显子： 编码区中不连续的具有蛋白编码功能的DNA序列。

从5端开始翻译起始密码子（ATG），到终止于终止密码子TGA，TAA，TAG。期间的序列就是我们所要获取的开放阅读框。

ORF从起始密码子（ATG）开始，到终止密码子（TAA，TAG，TGA）结束。所以在DNA序列中找到所有的ATG，所有的TAA/TAG/TGA。然后从一个ATG开始至一个TAA/TAG/TGA结束，并且在二者之间的DNA序列为3的倍数，即一个ORF。

ORF是理论上的氨基酸编码区，一般是在分析DNA核酸图谱中（主要是利用电脑程序）得到的。程序会自动在DNA序列中寻找启动因子（ATG或AUG），然后按每3个核酸一组，一直延伸寻找下去，直到碰到终止因子（TAA或TAG）。

2、构建基因表达载体时

在构建基因表达载体时要用到的工具酶有限制酶和DNA连接酶。基因表达载体的构建（即目的基因与运载体结合）是实施基因工程的第二步，也是基因工程的核心。

细菌表达载体如PET系列，载体有自身的启动子和终止子，只要把你片段从ATG后面到TAA加进去就行了。

基因表达载体时要用到的工具酶有限制酶和DNA连接酶。过程：首先要用一定的限制酶切割质粒，使质粒出现一个缺口，露出黏性末端。

保证核糖体结合位点后的第一个ATG与目的基因是间隔3的倍数个碱基。

3、基因表达载体的构建必须需要外显子和内含子吗?

结构基因，即目的基因，包括内含子和外显子。2调控序列，简单地说包括启动子、终止子。3标记基因。我只知道这么多。

完整的表达载体必须包括：复制子，在细菌中扩增时所必须。启动子，目的基因在细菌或细胞中转录所必须，转录了才能翻译，是谓“表达”。原核筛选标记，细菌增菌所必须。

真核生物的基因分编码区和非编码区，而非编码区又有外显子和内含子，内含子是不能编码为蛋白质的，所以不能直接用于基因的扩增。

可以插入内含子。某些内含子有增强子/减弱子的功能；可以改变mRNA的结构从而改变mRNA稳定性；可以表达小RNA从而改变翻译表达水平。

4、基因表达载体的构建所需的条件

作为一个基因表达载体，必须要满足以下条件：细菌的复制起始位点Ori；用来对转入质粒的细菌进行筛选的抗性基因比如：Kan Amp spec 等抗性筛选基因。

构建条件：必须能够在宿主细胞中复制，使重组基因能够在宿主基因中复制，从而稳定保存下来，这是作为运载体的必须条件。具有多个限制酶切点，从而可以使不同的粘性末端与之相连，增强实用性。

必须能够在宿主细胞中复制，使重组基因能够在宿主基因中复制，从而稳定保存下来，这是作为运载体的必须条件。

首先，能在细菌中稳定存在，有较高的拷贝数，具有选择标记的每一个标记基因都含有单一的酶切位点。其次，在复制时，需在特定的位点起始，具有特定核苷酸排列顺序的片段，即复制起始点。

5、融合蛋白表达载体如何构建

可以通过化学方法连接，也可通过基因的融合来实现。

蛋白表达系统的构建步骤通常包括以下几个关键的步骤：选择表达宿主系统：根据需要表达的蛋白的性质和规模，选择适合的表达宿主系统。常用的表达宿主系统包括大肠杆菌E. coli、酵母、昆虫细胞、哺乳动物细胞等。

构建表达载体首先取决于你的实验目的，例如你的实验是否要求你的蛋白表达出来必须可溶性蛋白，载体上面的标签决定了你的纯化方法，当然也决定了实验成本，等等一系列需求。

过表达载体构建方法可以通过多种方式来实现，比如使用基因组学、转录组学、蛋白质组学和代谢组学等方法。

首先要知道你要纯化蛋白的编码DNA序列，查阅相关文献，看目的基因在那些细胞或者组织中高表达，进而设计该基因的引物，扩增出目的DNA片段的ARF。

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