大家好，今天小编关注到一个比较有意思的话题，就是关于慢病毒载体的构建和shRNA的问题，于是小编就整理了1个相关介绍慢病毒载体的构建和shRNA的解答，让我们一起看看吧。

1. shRNA慢病毒载体合成步骤

1、shRNA慢病毒载体合成步骤

准备六孔板一个孔细胞，吸去细胞培养液，加入混匀了的病毒转染液（950μL培养基 50μL浓缩病毒 1μL 1000×Polybrene），37℃，5% CO2培养箱中培养。12h后，更换回普通培养基。

将actin基因，放入慢病毒融合表达载体，与荧光蛋白（GFP）融合表达，注意避免移码突变。然后将重组质粒以及辅助质粒共转染细胞，可以用脂质体法，慢病毒配套细胞一般为293。收集慢病毒，浓缩。用慢病毒转染原代细胞。

进行双酶切和测序鉴定。结果双酶切显示shRNA编码序列被成功插入pGenesil-1质粒中，测序结果证实插入片断与设计序列完全一致。结论所设计的shRNA编码序列被正确插入质粒骨架，成功构建了BRAF基因序列特异性的shRNA质粒载体。

慢病毒载体（Lentiviral vector， LVs）是在HIV-1病毒基础上改造而成的病毒载体系统，它能高效的将目的基因（蛋白质编码序列、shRNA或gRNA）导入动物和人的原代细胞或细胞系。

48h收获含病毒的上清，0.45um滤膜过滤， 同时再往6孔板中加入2ml完全培养基 感染细胞：用一份病毒液 2份完全培养基感染目的细胞。第五天： 72h后再次收获病毒上清。

到此，以上就是小编对于慢病毒载体的构建和shRNA的问题就介绍到这了，希望介绍关于慢病毒载体的构建和shRNA的1点解答对大家有用。