prok219载体构建质粒图谱(pbr322质粒载体)
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1、ProkⅡ质粒
我理解你的意思是以ProkⅡ质粒为模板来设计引物,扩增其上一段能表达的DNA序列对么?质粒上的序列 不像基因组上的序列那样复杂,每段DNA序列的功能都是已知的,没有多余序列。
首先打开NCBI网站首页,然后在search一栏中选择nucleotide,在框中输入你要的基因序列名称,点击search就行。然后会出来很多结果,因为很多基因是同名的,或是一个基因在不同种属中不一样,寻找你要的基因序列就行了。
根据质粒性质和转移特点,可分为接合型质粒和非接合型质粒,两者区别在于是否带有转移基因。接合型质粒具有在细胞间自我转移的能力,分子量大,每个细胞中质粒为1~3个拷贝。非接合型质粒分子量相对较小,在细胞中呈多拷贝。
构建好质粒之后我们一般先酶切鉴定,鉴定正确的可以直接拿去转染然后做WB检测表达即可。 可以正常表达的质粒我们需要送到测序公司测序,也可以直接送菌液测序,有些测序公司还提供质粒返还服务(即送菌液返还他们抽提的质粒)。
第一步,看箭头:大多数质粒都会有箭头,箭头有两种解释。一种是转录方向,转录方向主要是由启动子开始的一个大箭头,是启动子启动序列的顺序。
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