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1. 构建过表达载体需要3;utr吗

1、构建过表达载体需要3;utr吗

在构建 lncRNA 表达质粒时，需关注 lncRNA 是否在蛋白编码基因的启动子区域或 3 ′-UTR 区域 ，勿遗漏重要区段。引物设计是载体构建的第一步，也是最关键的一步，这直接决定了后续实验能否进行下去。

过表达载体主要是将目的基因的编码区（CDS）构建到相应的质粒或者病毒载体中，达到在目的基因过量表达的作用。过表达载体的主要元件：Promoter—gene—linker—Fluorescent gene—抗药筛选gene。

避免靶向5’和3’ UTRs区；有些基因特异性的模式，如空间位阻等也会降低基因编辑效率。特异性 截短gRNAs （trugRNAs）crRNA序列小于20个核苷酸，可以减少脱靶位点突变多达5000倍或更多，而不牺牲靶基因组编辑效率。

构建表达载体时目的片段可以携带utr区的碱基 首先要用一定的限制酶切割质粒，使质粒出现一个缺口，露出黏性末端。然后用同一种限制酶切断目的基因，使其产生相同的黏性末端（部分限制性内切酶可切割出平末端，拥有相同效果）。

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