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将T载体和目的基因构建的重组质粒转化后,t载体制备

将T载体和目的基因构建的重组质粒转化后,t载体制备

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  1. 质粒到达目的细胞后,会变成什么呢?质粒上的基因会怎样从质粒上分离出...

1、质粒到达目的细胞后,会变成什么呢?质粒上的基因会怎样从质粒上分离出...

细胞收获:对于高拷贝质粒(培养液中,2g DNA/mL),吸取1-3ml培养液,离心去上清;对于低拷贝质粒(培养液中,2g DNA/mL),吸取10-15ml培养液,离心去上清。

在DNA重组中,质粒或经过改造后的质粒载体可通过连接外源基因构成重组体。 从宿主细胞中提取质粒DNA,是DNA重组技术中最基础的实验技能。分离质粒DNA有三个步骤:培养细菌使质粒扩增,收集和裂解细菌,分离和纯化质粒DNA。

不一样。 若目的基因来自甲,要将其转入乙体内,则用某种限制酶将甲的目的基因切下,用同种酶切开质粒,由于同种酶切开的切口相同,目的基因就整合进了这个质粒里,而质粒原本是没有这个目的基因的。

转化的方法:最常用的是感受态法,包括热激和电转化等,转染不是转化,这是不同的概念。

不是以一样的!因为同种酶剪切,只是目的基因的左右两个的碱基类型和从质粒是剪出的基因是一样的,是方便可以用一种已知的(由剪切酶可以知道DNA连接酶的类型)DNA连接酶将目的基因导入质粒一次组合成一个新的质粒。

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