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1. 酵母单杂交实验中cDNA文库构建试剂盒的选择及操作步骤是啥啊?_百度...

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酵母单杂交原理：将已知的顺式作用元件构建到最基本启动子（minimal promoter，Pmin）上游，把报告基因连接到Pmin下游。

备注1：该酵母文库可以选择增加均一化处理步骤，我们使用DSN法均一化方法，可以构建出高质量的均一化酵母杂交文库，可以大大减少后续酵母筛选的工作量和筛选效率等。

构建基因组文库的步骤A 分离基因组DNA；B 用超声波或限制酶等进行基因组DNA部分或完全降解；C 将降解物进行分级得到所需大小DNA片段；D 将DNA片段与载体连接（一般用λ噬菌体载体）；E 将重组体导入宿主细胞；F 最后筛选鉴定重组子克隆。

最近在做龙须菜高温胁迫表达cDNA文库的构建，选择的是CaM做诱饵质粒构建表达载体pGBKT-CaM，利用SMART技术将重组质粒转化到酵母菌Y187中，搜集了部分资料找到了一份比较全的酵母双杂交实验操作步骤。

是单链cDNA，想合成双链cDNA需要另外操作：cDNA第二链的合成： 第一链反应完成后，取2ul一链产物－20℃冰箱中保存，待电泳检测。

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