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1. 表达载体的构建中目的片段与表达载体的连接最好是几个小时?时间长一点...

1、表达载体的构建中目的片段与表达载体的连接最好是几个小时?时间长一点...

目的基因重组表达载体的构建是将目的基因与适当的调控序列（如启动子、转录终止信号序列等）和标记基因连接在一起，形成重组表达载体。这个过程通常需要使用限制性核酸内切酶和连接酶等工具酶，以确保重组载体的正确性和稳定性。

目的基因前面必须有启动子啊。而启动子是和你的载体转入的宿主对应的。比如，你要转载体到大肠杆菌里面，目的基因前面得有原核启动子，效率越高越好。而，启动子和基因的距离会影响表达效率。

你的片段如果是PCR产物双酶切后用于连接，建议酶切时间长一些，以保证能完全切开，也就是说你得连接过程要保证没有问题。如果一种感受态菌株不行的话，建议你试试其它菌株。

把提到的质粒，双酶切，跑胶，看看是不是2条带，1条200多，1条5000多。如果是，就没问题，不用纠结了。 如果不是，那你的质粒有问题。

侵染宿主细胞之后，反转录酶启动，将RNA进行逆转录，产生DNA，之后用限制酶对载体质粒和病毒反转录产生的DNA进行切割，从而构成基因表达载体。PS：病毒没有细胞结构，不能进行逆转录。其转录和翻译的原料都来源于宿主细胞。

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