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1. 如何构建miRNA的表达载体

1、如何构建miRNA的表达载体

双荧光素酶报告基因系统：该方法通过构建含有miRNA靶标位点的Luciferase报告基因载体，并将其转染至细胞中，然后共转染miRNA和Luciferase报告基因载体。

对于miRNA的上调，我们常常构建表达载体。制备起来非常简单。我们只是扩增miRNA发夹结构及一些侧翼序列，并直接克隆PCR产物。

c）miRNA-mRNA双链之间的热稳定性；（d）miRNA靶位点不会有复杂的二级结构；（e）miRNA 5’端于靶基因的结合能力强于3’端。除了这些基本原则以外，不同的预测方法还会根据各自总结的规律对算法进行限制和优化。

将目的基因3’UTR区域或者lncRNA序列构建至载体中报告基因Luciferase的后面，构建荧光素酶质粒。

载体形式的miRNA inhibitor，采用的方法如miRNA sponge法，这也是目前SCI文献中用的较多的一种方法。 作用方式 microRNA-RISC对靶基因mRNA的作用主要取决于它与靶基因转录体序列互补的程度，有三种方式。

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