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1. 构建酵母双杂载体,其中一个基因老是连接不上是什么原因

1、构建酵母双杂载体,其中一个基因老是连接不上是什么原因

因为转进去的两个质粒上具有合成两种氨基酸的基因，所以在两缺板子上能生长。如果两个蛋白能互作，报告基因被激活，所以能在三缺或四缺板子上生长，如果不能互作，就不生长。

⑵酵母双杂交系统的一个重要的问题是假阳性。由于某些蛋白本身具有激活转录功能或在酵母中表达时发挥转录激活作用， 使DNA结合结构域杂交蛋白在无特异激活结构域的情况下可激活转录。

培养条件问题：可能是由于培养条件不适合导致的，例如温度、养分等条件没有达到要求，导致酵母无法正常生长。 杂菌污染：培养基中被杂菌污染，导致酵母无法正常生长。

假阳性现象 多种原因可能造成假阳性结果，常见的有以下三种：筛到的文库蛋白自身具有转录活性，能够启动报告基因的表达——这种情况需要对筛到的候选蛋白进行自激活验证。

如果你的两个蛋白能相互作用，它们手上的镜子就能拼在一起，也就是BD和AD可以结合， 它们结合以后，就形成了一个完整的镜子：呈现完整的GAL4转录因子活性并可激活UAS下游启动子，使启动子下游基因LacZ得到转录而报告出来。

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