载体构建时质粒选择,载体质粒通常采用什么作为筛选标记基因
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1、如何选择质粒载体
如何选择质粒载体用于克隆表达的质粒载体通常涉及的三要素:1.复制子:又称复制起始区,包含控制质粒DNA复制起点和质粒拷贝数等遗传因素。复制子可分为为:①严谨型复制子②松弛型复制子。
克隆载体可以在菌种繁殖,但是因为没有基因的启动子、终止子等序列,所以,外源基因在菌中无法表达,一般用来扩增质粒量;表达载体中含有启动子,终止子等基因表达所需的部件,故可以在菌体中表达相应的蛋白。
如何为一个已知基因选择合适的质粒载体 首先要用一定的限制酶切割质粒,使质粒出现一个缺口,露出黏性末端。然后用同 一种限制酶切断目的基因,使其产生相同的黏性末端(部分限制性内切酶可切割出平末端,拥有相同效果)。
理想的质粒载体条件:具有复制起始点。具有两种以上易被检测的选择性标记。在选择标记上具有多种限制酶的单一切点。具有尽可能小的相对分子质量。应属于松弛复制型。应为非传递性质粒理想值粒载体。
有一定的标记基因,便于进行筛选。如大肠杆菌的pBR322质粒携带氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因,就可以作为筛选的标记基因。
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