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载体构建一般要多久-载体构建一般要多久完成

载体构建一般要多久-载体构建一般要多久完成

大家好,今天小编关注到一个比较有意思的话题,就是关于载体构建一般要多久的问题,于是小编就整理了1个相关介绍载体构建一般要多久的解答,让我们一起看看吧。

  1. 构建载体连接时间最短多长

1、构建载体连接时间最短多长

在20 μl的连接反应体系中,6 μg的λDNA-Hind III的分解物在16℃下反应30分钟时,有90%以上的DNA片段被连接所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。

连接时间至少4h,能过夜就过夜。6)转化的时候:休克后加入培养基,孵育50min,最多不超过1h,转速不要高,大约150-170rpm。然后稍加离心弃去上清,留下大约200ul涂板子就可以了。

分钟可完成连接反应。在进行DNA重组时,将目的基因连接到零背景载体上所需的时间。由于零背景载体本身是一种高效的限制性内切酶位点缺失的载体,可以避免背景杂交的问题,因此在30分钟可完成连接反应。

小时。平末端(bluntend)的连接5’端与3’端并列靠近的时间太短,不容易被连接酶连接。T4DNA连接酶虽然能连接平末端,但效率很低只有粘性末端的效率很低,通常连载时间为小时。

短片段连完直接转化掉是最保险的。长片段有些需要过夜连接。一般24-36小时足够了。现在有些公司有t载体快速连接酶,说明书上说20-30分钟就可以了。有基因克隆方面的需要可以咨询百替生物哦,我们专业提供生物医药技术服务。

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