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AtU6启动子构建其他物种载体(actin启动子)

AtU6启动子构建其他物种载体(actin启动子)

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  1. 双荧光素酶应用实例(一)

1、双荧光素酶应用实例(一)

例子4 例子5---启动子结构分析。将启动子区域(约2k左右)进行分段截短或突变,构建入报告基因载体,检测荧光素酶活性。

细胞处理: 双荧光素酶检测试剂盒依照protocol操作;荧光检测: 使用酶标仪或具有类似检测功能的设备进行荧光强度检测 数据分析 实验案例:CDK9是miR-206的靶标(a),但是CDK9突变型不是miR-206的靶标(b)。

萤光素酶还可以作为“报告蛋白”被用于分子生物学研究中,例如,用于在转染过萤光素酶的细胞中检测特定启动子的转录情况或用于探测细胞内的ATP的水平;这一技术被称为报告基因检测法或萤光素酶检测法(Luciferase Assay)。

共转染:将构建好的双荧光素酶质粒与其他目标质粒(例如表达转录因子、信号分子等)一起转染入目标细胞。可以使用化学方法(如磷酸钙法、脂质体转染法)或生物物理方法(如电穿孔法、基因枪法)进行转染。

以Promega公司双荧光素酶检测试剂盒为例: 试剂准备 按照说明书配制PLB细胞裂解液、LAR II检测液、StopGlo检测液。

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